促红细胞生成素对高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡的影响

发布时间：2017-11-17 03:19

  本文关键词：促红细胞生成素对高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡的影响

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【摘要】：目的：研究促红细胞生成素(erythropoietin, EPO)对高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡的影响,以及内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)在其中的作用。方法：分离新生SD大鼠心肌细胞,采用α-actin抗体进行免疫组化鉴定心肌细胞；培养心肌细胞72小时后用高糖诱导心肌细胞,以甘露醇组作为高渗对照,用不同浓度EPO(5U/ml、10U/ml、20U/ml、40U/ml)预处理心肌细胞48h后用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,选取EPO最佳干预浓度；并用内质网应激抑制剂4-苯基丁酸(4-phenylbutyrate acid,PBA)进行干预来探讨EPO抑制心肌细胞凋亡的相关机制：将实验分成五组即正常糖(NG)、高糖(HG)、4-苯基丁酸+高糖(PBA)、EPO+正常糖(EPO+NG)、EPO+高糖组(EPO+HG),流式细胞仪测各组凋亡率,用激光共聚焦显微镜分别检测各组心肌细胞内钙离子的平均荧光强度,通过Real-time PCR检测各组EPOR、GRP78.Serca2a的mRNA表达变化,Western Blotting检测各组EPOR、GRP78、Serca2a的蛋白表达。结果：细胞培养24小时后可见单个细胞自发性搏动,采用α-actin抗体免疫组化鉴定为心肌细胞。高糖诱导后心肌细胞凋亡率明显高于正常糖组[(41.36±10.49)%vs(16.08±3.97)%,P0.05]; 5U/ml、10U/ml、20U/ml、 40U/ml EPO预处理高糖诱导的心肌细胞后,可见其凋亡率分别为(36.59±19.94)%,(29.63±16.4)%,(20.97±10.55)%及(24.08±8.30)%,选20U8ml的EPO作为最佳干预浓度。甘露醇组较正常糖组凋亡率无差异(P0.05),PBA组凋亡率较HG组降低(P0.05)。与NG组比较,HG组钙离子荧光强度增强(P0.05),EPOR.Serca2a的mRNA及蛋白表达降低,GRP78mRNA及蛋白表达升高(P0.05),EPO+NG组钙离子荧光强度,EPOR、Serca2a mRNA及GRP78mRNA及蛋白表达无差异(P0.05)；与HG组比较,PBA组和EPO+HG组钙离子荧光强度降低,EPOR、Serca2a的mRNA及蛋白表达升高,GRP78mRNA及蛋白表达降低(P0.05); PBA组与EPO+HG组比较凋亡率,钙离子荧光强度,EPOR、Serca2a mRNA及GRP78mRNA及蛋白表达无差异(P0.05)。结论：1.高糖可通过诱导内质网应激及钙稳态失衡引发心肌细胞凋亡；2.促红细胞生成素能够抑制高糖诱导心肌细胞的凋亡,其作用机制可能与抑制内质网应激有关,通过抑制心肌细胞内质网应激增强内质网钙内流蛋白表达,维持细胞内钙离子平衡而降低心肌细胞凋亡。
【学位授予单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.2;R542.2

【参考文献】

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1 马宝新;李花;吴绥生;;促红细胞生成素衍生物抗糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的作用及其机制[J];中华临床医师杂志(电子版);2015年01期

2 李梦;戴德哉;于锋;戴茵;;糖尿病心肌病的内质网病变机制及六味地黄汤的治疗作用[J];中药药理与临床;2013年02期

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本文编号：1194635