创面负压治疗对糖尿病足创面肉芽组织TGF-β1的影响

发布时间：2017-12-04 08:07

  本文关键词：创面负压治疗对糖尿病足创面肉芽组织TGF-β1的影响

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【摘要】：目的:通过分析创面负压治疗前后和传统纱布换药治疗前后糖尿病足创面肉芽组织中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达差异,探讨创面负压治疗对糖尿病足肉芽组织TGF-β1的影响,为创面负压治疗促进糖尿病足创面愈合提供理论依据。方法:1选取2013年11月至2015年3月间于解放军白求恩国际和平医院内分泌科住院并符合入组标准、排除标准的糖尿病足患者40例。通过计算机进行完全随机化分组将患者随机分为创面负压治疗组(NPWT组)和传统纱布换药治疗组(对照组),每组20例。2 NPWT组予以创面负压治疗,对照组予以传统纱布换药治疗。两组受试者分别于治疗前(0天)及治疗第7天(7天)取创面肉芽组织,每份创面肉芽组织均分为三组,并分别标记为A组、B组和C组。3 A组取材后于4%多聚甲醛溶液中固定,4℃保存,标本收齐后集中行蜡块包埋保存。4取部分石蜡包埋的A组组织,切片并行HE染色,于光学显微镜(400×)下观察肉芽组织生长情况。5取部分石蜡包埋的A组组织,切片并行免疫组织化学染色,于光学显微镜(400×)下定性观察TGF-β1表达情况,镜下观察棕黄色或棕褐色颗粒表示染色阳性。每个切片随机选取5个视野拍照;用数字医学图像分析系统(MoticMedical 6.0)对每个切片的5个随机视野行光密度分析,平均光密度值(optical density,OD)表示每个切片TGF-β1含量,对TGF-β1行定量分析。6 B组于-80℃冰箱中保存,标本收齐后行Western blot分析,β-actin为内参照蛋白,Image J软件分析条带灰度。用TGF-β1与β-actin条带灰度比值表示每个条带TGF-β1含量,对TGF-β1蛋白表达行定量分析;7 C组取材后活组织立即放入液氮中送实验室于-80℃冰箱中保存,并立即行real-timepcr。所有实验过程在无rna酶环境下行扩增并对pcr行荧光定量检测。上游和下游引物对被设计为5′cccacaacgaaatctatgaca3′和5′agagcaacacgggttcag3′。gapdh为内参照基因,设置对照组的第1号样品为标准1,得到各样本各目的基因的ct值。按照公式rq=2-ΔΔct计算各目的基因表达的相对定量值(rq值),用rq代表tgf-β1mrna表达量并进行统计分析。结果:1肉眼观察npwt组和对照组治疗前创面,见肉芽组织色泽晦暗,触之发硬;镜下观察两组治疗前创面he染色切片,见新鲜肉芽组织少,成纤维细胞少,新生血管少,炎性细胞多。肉眼观察治疗npwt组和对照组治疗第7天创面,见新鲜肉芽组织形成,其中npwt组较对照组新鲜肉芽组织形成明显,表现为鲜红色、颗粒状,触柔软湿润;镜下观察两组治疗第7天he染色切片,可见新生肉芽组织,npwt组较对照组明显,表现为大量新生血管和大量成纤维细胞形成;2镜下观察经免疫组织化学染色的切片,见npwt组和对照组治疗前创面肉芽组织中代表tgf-β1阳性的棕黄色或棕褐色颗粒少,两组治疗后第7天创面肉芽组织中其中代表tgf-β1阳性的棕黄色或棕褐色颗粒增多,其中npwt组较对照组更明显。用平均光密度代表tgf-β1含量,对tgf-β1行定量分析:较治疗前,治疗第7天的npwt组和对照组均存在创面肉芽组织tgf-β1表达上调(npwt组t=8.250,p0.01,α=0.05;对照组t=3.204,p0.01,α=0.05),其中npwt组tgf-β1上调较对照组明显(t=5.96,p0.01,α=0.05),有统计学意义;3western印迹分析显示:较治疗前,治疗第7天的npwt组和对照组均存在创面肉芽组织tgf-β1表达上调(npwt组t=5.648,p0.01,α=0.05;对照组t=10.734,p0.01,α=0.05),其中npwt组tgf-β1上调较对照组明显(t=9.62,p0.01,α=0.05),有统计学意义;4rt-pcr分析tgf-β1基因表达水平显示,治疗第7天的npwt组和对照组肉芽组织均存在tgf-β1基因表达上调(npwt组t=11.321,p0.01,α=0.05;对照组t=9.671,p0.01,α=0.05),其中npwt组tgf-β1基因表达上调较对照组明显(t=8.02,p0.01,α=0.05),有统计学意义。结论:创面负压治疗和传统纱布换药治疗可在一定程度上促进糖尿病创面肉芽组织tgf-β1蛋白表达上调及基因表达上调,增加创面肉芽组织形成,促进创面愈合。和传统纱布换药治疗相比,创面负压治疗更能明显促进糖尿病足创面肉芽组织TGF-β1蛋白表达上调及基因表达上调,增加创面肉芽组织形成,从而加速创面的愈合。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.2

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本文编号：1250299