慢病毒介导的SCL基因体外转染ICC效果研究

发布时间：2017-12-05 16:25

  本文关键词：慢病毒介导的SCL基因体外转染ICC效果研究

  更多相关文章： ICC样细胞 人SCL基因 重组慢病毒载体 转染 PCR

【摘要】：目的:利用含有干细胞白血病(stem cell leukemia,SCL)的慢病毒介质转染体外培养的ICC样细胞,评估SCL基因慢病毒对膀胱ICC的体外转染效果。方法:利用差速贴壁法体外分离、培养ICC样细胞,并用ICC样细胞特异性标记物c-kit抗体进行免疫标记染色鉴定体外培养的ICC。用含SCL基因的重组慢病毒转染体外培养的ICC,参照慢病毒作用时间,分别于转染后第2天、第3天、第5天运用激光共聚焦显微镜通过观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达计算转染效率,并提取细胞总RNA,利用RT-PCR方法检测重组慢病毒载体介导的SCL基因在体外培养ICC的表达。结果:激光共聚焦显微镜下通过绿色荧光蛋白(GFP)的表达计算重组慢病毒对体外ICC样细胞的转染效率,在MOI=10,转染后第72小时转染效率最高、生物活性最高、安全性最高,重组慢病毒能高效转染ICC样细胞,转染效率达85%。分别在慢病毒转染豚鼠膀胱ICC样细胞后的第2天,3天、5天后通过RNA试剂盒提取细胞总RNA,通过RT-PCR法检测慢病毒介导的SCL基因在ICC样细胞中的表达。通过琼脂糖凝胶电泳实验能够发现,实验组出现大小为1036bp特异性条带,与SCL基因的大小一致,但是正常参照组和阳性参照组都没有SCL基因表达。证实重组慢病毒载体可以有效地介导人SCL的表达。结论:成功体外培养并鉴定豚鼠膀胱ICC样细胞,利用含人SCL基因的重组慢病毒载体能高效转染体外培养ICC样细胞,并成功介导SCL在ICC样细胞中的表达,为下一步研究利用SCL基因进行体内转染实验奠定基础。
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.2;R694.5

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本文编号：1255443