蛋白酶体抑制剂MG132对大鼠胶原诱导性关节炎的干预作用探讨

发布时间：2017-12-06 01:19

  本文关键词：蛋白酶体抑制剂MG132对大鼠胶原诱导性关节炎的干预作用探讨

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【摘要】：目的:探讨20S蛋白酶体在人类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)中的变化情况以及蛋白酶体抑制剂MG132对大鼠胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)的干预效果及作用机制。方法:1、酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测53例RA患者和35例健康对照者血清20S蛋白酶体含量。2.将64只健康清洁级雌性SD大鼠随机分为空白对照组、CIA模型组、MG132干预模型组、单纯MG132对照组共4组,每组16只。CIA模型组和MG132干预模型组注射牛Ⅱ型胶原建立CIA模型大鼠,在初次免疫后第21天,干预组大鼠以1mg/kg的剂量皮下注射MG132,每天一次,连续两周(14天)。单纯MG132对照组大鼠注射相同剂量的MG132。从建模开始每周观察大鼠关节肿胀程度,计算关节炎指数(arthritis index,AI),在注射MG132干预完成后一周即初次免疫第42天称重并处死大鼠,取肝脏称重测量肝脏指数,检测血清尿素氮、肌酐、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)的含量;ELISA检测血清TNF-α、IL-6、IL-10的含量;HE染色观察关节滑膜组织的病理改变;荧光底物测定法检测滑膜组织20S蛋白酶体的活性;蛋白质印迹法(western blot)检测大鼠关节滑膜组织NF-κB/p65、IκBα蛋白的表达情况。结果:1、RA患者血清20S蛋白酶体含量比健康对照组高,差异有统计学意义(p0.05)。2.与CIA模型组比较,MG132干预模型组大鼠关节炎指数在注射完MG132后一周明显降低,差异有统计学意义(p0.05),且关节滑膜组织未见明显增生,只伴有少量炎性细胞浸润。3.与空白对照组大鼠比较,CIA模型组大鼠关节滑膜组织20S蛋白酶体活性增高,皮下注射MG132干预后关节滑膜组织20S蛋白酶体活性降低,与CIA模型组比较差异有统计学意义(p0.05)。4.CIA模型组大鼠血清TNF-α、IL-6水平高于空白对照组(p0.05),IL-10的水平低于空白对照组(p0.05),注射蛋白酶体抑制剂MG132干预后,其血清TNF-α、IL-6水平显著降低(p0.01),而IL-10的水平显著升高(p0.01)。5.CIA模型组大鼠关节滑膜组织高表达NF-κB/p65蛋白,以胞核NF-κB/p65表达增高更为明显,与空白对照组比较差异有统计学意义(p0.01),注射蛋白酶体抑制剂MG132干预后,其滑膜组织胞浆及胞核NF-κB/p65蛋白表达均显著减少(p0.01)。6.与空白对照组比较,CIA模型组大鼠关节滑膜低表达IκBα蛋白(p0.01),注射MG132干预后关节滑膜IκBα蛋白表达显著增多(p0.01)。7.正常大鼠皮下注射相同干预剂量的蛋白酶体抑制剂MG132后大鼠肝脏指数及血清尿素氮、肌酐、ALT、AST的含量与空白对照组比较差异无统计学意义。结论:RA患者血清中20S蛋白酶体呈高表达。大鼠CIA体内实验显示,皮下注射蛋白酶体抑制剂MG132可明显改善大鼠关节炎症状,其作用机制可能与MG132降低大鼠CIA关节滑膜组织20S蛋白酶体活性,减少其底物蛋白IκBα的表达,从而抑制NF-κB活性有关。3.一定干预剂量的MG132对正常SD大鼠肝肾功能无明显影响。
【学位授予单位】：贵州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R593.22

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