MicroRNA-199a在小鼠肥胖发生中的作用研究

发布时间：2017-12-14 10:28

  本文关键词：MicroRNA-199a在小鼠肥胖发生中的作用研究

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【摘要】：目的研究miR-199a对肥胖小鼠整体糖脂代谢状况的影响；探讨miR-199a与脂肪分化、脂肪生成相关的关键转录因子过氧化物酶增殖物激活受体(Peroxisome Proliferator Activated Receptor gamma, PPARγ)、CCAAT增强结合蛋白(CCAAT/enhancer binding proteins alpha, C/EBPa)、脂肪细胞脂肪酸结合蛋白(adipocyte fatty acid-binding protein, aP2)以及固醇调控元件结合蛋白1(sterol regulatory element binding protein-1,SREBP1)等基因的关系,进一步明确miR-199a基因与肥胖发生发展的关联性,为深入理解脂肪分化障碍相关的肥胖机制及治疗提供理论依据。方法取40只雄性C57/BL6J小鼠(18-22g)：20只普通C57/BL6J小鼠,20只敲除瘦素小鼠(ob/ob小鼠),适应性喂养一周,按照2*2析因分析设计分成4组：对照组(C1)、高脂组(C2)、敲瘦素组(01)、敲瘦素高脂组(02)。其中,高脂组和敲瘦素高脂组饲喂高脂饲料,其余两组饲喂正常饲料,连续喂养12周。每周称量体重,测量体长,记录饮水量、摄食量等一般情况。实验末期,利用双能X射线扫描仪进行活体全身体脂肪(不包括头部)的测定；使用安稳血糖仪进行血糖水平的测量；采用多功能酶标仪测量甘油三酯(triglycerides, TG)、总胆固醇(total cholesterol, TC)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)以及低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol, LDL-C)的吸光度OD值；采用Folch法从白色脂肪组织中提取脂质,采用酶联免疫分析法进行游离脂肪酸(free fatty acid, FFA)和TG的测定；采用苏木精-伊红(HE)染色方法对白色脂肪组织进行石蜡切片染色,采用油红O染色方法对白色脂肪组织进行冰冻切片染色;采用实时荧光定量PCR方法中的SYBR Green法检测miR-199a、PPARγ2.C/EBPα、aP2、SREBP-1c在各组小鼠脂肪组织中的的表达水平,同时采用Taqman探针法复检测miR-199a在各组小鼠脂肪组织中的表达水平。结果1.各组小鼠进食量、周体重、Lee's指数、全身脂肪含量各组小鼠在喂养期间进食量、体重稳定增加。敲瘦素高脂组(02)体重、Lee's指数、全身脂肪含量最高,对照组(C1)相应检测指标最低。进行析因分析后,其中两处理因素(瘦素基因与高脂喂养)在体重、全身脂肪含量指标中存在交互作用(P0.05)；2.各组小鼠相关糖脂代谢指标水平各组小鼠血糖水平虽有差异,但无统计学意义(P0.05)；血清TG、TC、HDL-C、LDL-C、HDL-C/LDL-C水平及脂质中FFA、TG含量在瘦素基因水平(有或无)上均出现统计学意义(P0.05),敲瘦素基因的小鼠(O1组、02组)各糖脂代谢指标水平均高于非敲除组(C1组、C2组)；在饮食水平上,血清中TG、TC,脂质中FFA、TG水平出现统计学差异,水平均高于正常饲料组小鼠；3.各组小鼠脂肪细胞体积及脂滴大小HE染色结果显示,肥胖组小鼠(O1组、02组)单位面积内细胞计数较非肥胖组小鼠(C1组、C2组)数目减少,两处理因素(瘦素基因和饮食水平)都出现统计学差异(P0.05)；油红O染色可见,肥胖组脂滴较非肥胖组大；4.miR-199a、PPARγ2、C/EBPα、aP2、SREBP-1c的相对表达水平SYBR Green法检测肥胖组小鼠miR-199a、PPARγ2.C/EBPα、aP2.SREBP-1c的相对表达量较非肥胖组高,具有统计学意义(P0.05)；Taqman探针法检测miR-199a肥胖组表达水平较高,与SYBR Green法检测具有一致性,相关系数r为0.72,为正相关关系,具有统计学意义(P0.05)；5.miR-199a表达水平与Lee's指数、全身脂肪含量及脂质中FFA、TG的相关性miR-199a表达水平与上述指标存在相关性,相关系数r分别为0.60、0.64、0.53、0.85,都具有明显的统计学差异(P0.01),表现为正相关关系。结论1.高能量饲喂和敲瘦素基因都可促进肥胖的发生,具体表现为体重增加、Lee's指数变大、体脂肪含量积聚、糖脂代谢紊乱、游离脂肪酸和甘油三酯增加、脂肪细胞体积和脂滴变大；2.高能量饲喂和敲瘦素基因可同时促进肥胖的发生,二者具有相关性,或存在交互作用(表现为协同作用)；3.肥胖小鼠miR-199a、PPARy2、C/EBPα、aP2、SREBP-1c基因在脂肪组织中的表达上调,miR-199a与PPARγ2、C/EBPα等脂肪分化因子在脂肪组织中表达一致,提示miR-199a基因可能通过参与脂肪细胞的分化以调控肥胖相关基因的代谢；4. miR-199a表达水平与Lee's指数、体脂肪含量、游离脂肪酸和甘油三酯等呈现正相关关系,提示miR-199a与肥胖的中间代谢有关,参与脂质积聚的过程,与肥胖的发生发展有直接的相关关系。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R589.2

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本文编号：1287558