中性粒细胞胞外诱捕网在SLE中的作用

发布时间：2017-12-14 11:02

  本文关键词：中性粒细胞胞外诱捕网在SLE中的作用

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【摘要】：研究背景:系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种累及多系统、多器官的自身免疫病,以抗核抗体产生和免疫复合物聚集为特征。中性粒细胞是机体的第一道免疫防线,数量多,寿命短。生理情况下,凋亡是主要的中性粒细胞死亡方式。但除了发生凋亡外,中性粒细胞还可以发生NETosis。NETosis是在2004年首次被发现的一种中性粒细胞不同于凋亡和坏死的死亡形式。中性粒细胞发生NETosis时产生NETs(neutrophil extracellular traps,中性粒细胞胞外诱捕网),NETs是由DNA、组蛋白、抗菌肽及弹性蛋白酶等形成的网状结构。有研究表明,NETs产生过程中因核物质以及蛋白质暴露在细胞表面,可能成为自身抗原,引起自身抗体的产生,形成免疫复合物,并且刺激某些炎性细胞因子的分泌,因而NETs可能与SLE的发病机制密切相关。目的:分析SLE患者是否存在NETs水平异常,以及SLE患者血浆内环境对NETs形成的影响,并分析NETs与SLE临床指标的相关性及NETs在SLE致炎细胞因子分泌中的作用,从而明确NETs在SLE病理过程中的可能作用。方法:1.收集44例女性SLE患者空腹外周静脉血,肝素抗凝,无菌分离中性粒细胞(polymorphonuclear leucocyte,PMN),血浆冻存于-80℃备用,同时收集SLE患者的临床资料。以42例年龄性别相匹配的健康体检者作为健康对照(healthy control,HC)组。2.nets检测:一部分pmn用荧光光度法定量测定nets形成率,分析nets在sle患者组和对照组之间是否有差异,并分析nets水平与esr、crp、抗dsdna抗体、抗组蛋白抗体、抗核小体抗体和sledai评分等临床指标的相关性。另一部分pmn用细胞间接免疫荧光法检测nets组分之一的中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophilelastase,ne),同时用dapi标记细胞核,利用激光共聚焦显微镜观察nets的形态结构。3.采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbentassay,elisa)测定血浆中ne的浓度,分析其在sle组和hc组之间是否存在差异,以及ne浓度与esr、crp、抗dsdna抗体、抗组蛋白抗体、抗核小体抗体和sledai评分等临床指标的相关性。4.收集30例活动期sle及健康对照者的血浆分别制备成混合血浆,处理33例健康者的外周血白细胞24h后,收集培养上清和细胞。培养上清用于检测il-17、il-6和ifn-α浓度,采用荧光光度法检测pmn的nets形成率。分析两组之间的差异。5.用浓度分别为0、12.5、25和50nm的佛波酯刺激健康者的pmn(产生的nets随佛波酯浓度增加而增加),分别用以刺激外周血单个核细胞24、48h,收集培养上清检测il-17、il-6和ifn-α浓度,分析nets在不同水平和不同处理时间对外周血单个核细胞分泌il-17、il-6和ifn-α等细胞因子的影响。结果:1.女性sle患者组与健康对照组比较,nets荧光强度为[(240.82±139.20)vs(172.57±134.61),p=0.002],sle组nets水平显著增高。2.sle患者nets水平与sledai呈正相关(r=0.402,p=0.020),与crp(r=0.122,p=0.504)、esr(r=0.291,p=0.101)、抗dsdna抗体(r=-0.065,p=0.675)、抗组蛋白抗体(r=0.034,p=0.827)、抗核小体抗体(r=-0.268,p=0.078)均无明显相关性。3.sle组与健康对照组比较,血浆中ne浓度为[(102.02±47.02)vs(61.76±22.25),p=0.000],sle组ne水平显著高于对照组。4.sle患者血浆中ne水平与sledai呈正相关(r=0.341,p=0.032),与crp(r=-0.437,p=0.07)、esr(r=-0.021,p=0.926)、抗dsdna抗体(r=0.177,p=0.409)、抗组蛋白抗体(r=-0.291,p=0.167)、抗核小体抗体(r=0.202,p=0.343)无明显相关性。5.外周血白细胞经sle混合血浆和健康对照混合血浆培养24h后,(1)两组间nets荧光强度比较:[(88.06±47.01)vs(63.89±50.49),p=0.000],有显著差异。结果表明,经sle混合血浆处理的pmn,其nets水平增加。(2)两组间致炎细胞因子浓度比较:il-17浓度为[5.77(2.42,12.11)pg/mlvs2.99(1.82,3.87)pg/ml,p=0.002)],il-6浓度为[606.69(233.64,916.76)pg/mlvs93.71(13.09,181.54)pg/ml,p=0.000],ifn-α浓度为[(98.32±53.13)pg/mlvs(10.92±10.11)pg/ml,p=0.000],均有显著差异。结果表明,外周血白细胞经sle混合血浆处理后,培养上清中致炎细胞因子il-17、il-6和ifn-α的浓度显著高于健康对照混合血浆处理组。6.经不同水平的nets刺激外周血单个核细胞24、48h后,致炎细胞因子il-6和ifn-α浓度显著高于未处理组,但il-17浓度增高趋势不明显,且随着处理时间的延长,这些细胞因子浓度增高。结论:1.女性SLE患者组NETs水平显著高于健康对照组,表明SLE患者有NETs形成增强,推测NETs可能参与SLE的病理过程。2.SLE患者NETs水平与SLE疾病活动度评分正相关,表明NETs可能作为SLE严重程度的评价指标。但我们的结果未发现NETs与机体自身抗体的形成有关。3.SLE血浆可促进中性粒细胞形成NETs,效应分子可能包含血浆中IL-17、IL-6和IFN-α等致炎细胞因子。4.佛波酯处理PMN形成的NETs,可以刺激IL-6和IFN-α增高,表明NETs可能是导致SLE炎性病变的原因之一。
【学位授予单位】：川北医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R593.241;R446

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本文编号：1287636