Indian Hedgehog信号通路相关因子在氟中毒大鼠软骨组织及软骨细胞中的表达及其意义

发布时间：2017-12-16 04:32

  本文关键词：Indian Hedgehog信号通路相关因子在氟中毒大鼠软骨组织及软骨细胞中的表达及其意义

  更多相关文章： 氟中毒 软骨细胞 Ihh信号通路 关节软骨 增殖 凋亡

【摘要】：目的通过检测慢性氟中毒大鼠软骨组织及其软骨细胞中Ihh、Smo、PTHrp蛋白与mRNA表达水平变化,探讨Indian hedgehog(Ihh)信号通路在慢性氟中毒体内及体外的作用与机制。方法1、建立动物染氟模型,SD大鼠36只,按体重随机分为3组,每组12只,对照组:氟离子浓度1 mg/L、低氟中毒组:NaF浓度5 mg/L、高氟中毒组:NaF浓度50 mg/L。饲养6个月后应用氟离子选择电极法测定尿氟,股骨骨氟,苏木素-伊红(Hematoxylin and Eosin,HE)染色后光镜下观察软骨组织形态学病理改变;免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)PV-6001法检测大鼠关节软骨组织中Ihh、Smo、PTHrp蛋白以及凋亡调控蛋白Bcl-2、Bax和增殖调控蛋白Cyclin D1、PCNA表达情况。2、建立细胞染氟模型,原代培养乳鼠关节软骨细胞,传第3代后按染氟浓度不同分为0(对照)、5、10、20、40 mg/L组,噻唑蓝(MTT)、流式细胞术分别检测各组细胞增殖、凋亡的变化。蛋白印迹(Western Blot)和逆转录PCR(RT-PCR)检测各组染氟48 h后Ihh信号通路中Ihh、Smo、PTHrp的蛋白及其mRNA表达含量。结果1、慢性氟中毒大鼠模型建立成功。与对照组(1.73±0.07、1.95±0.06)相比,低、高氟组大鼠尿氟、骨氟含量(2.34±0.21、4.33±0.46;98.81±9.03、131.52±9.14)逐渐升高,差异有统计学意义(P0.05);2、光镜观察发现,随着染氟剂量增加,低、高氟组较对照组关节软骨组织明显变薄且排列紊乱,部分细胞有变性。3、大鼠软骨组织免疫组化与Western blot结果显示,与对照组相比,低、高氟组Ihh、Smo、PTHrp、Bax蛋白表达逐渐升高,而低、高氟组Bcl-2、Cyclin D1、PCNA蛋白表达降低,差异有统计学意义(P0.05)。4、成功获得了性状和表型一致的大鼠软骨细胞,MTT结果显示,与对照组比较,各时间段5 mg/L染氟组细胞增殖率[1.10±0.08、1.13±0.08、1.15±0.08比1.17±0.07、1.20±0.06、1.16±0.08]明显升高,差异有统计学意义(P0.05),40 mg/L染氟组细胞48h、72h增殖活性[0.72±0.11、0.68±0.04]则显著降低(P0.05)。流式检测结果表明,与对照组相比较,24、48、72 h时40 mg/L染氟组软骨细胞凋亡率逐渐增高[(19.87±3.03)%、(25.30±1.28)%、(45.73±4.63)%]差异有统计学意义(P0.05)。5、与对照组相比,培养48 h后Ihh、Smo、PTHrp的蛋白及其mRNA表达在染氟各组(Ihh蛋白:0.77±0.08比0.98±0.07、1.23±0.06、1.37±0.07、1.34±0.07;PTHrp蛋白:0.68±0.04比0.89±0.05、0.83±0.05、1.29±0.05、1.16±0.08;Smo蛋白:0.37±0.01比0.64±0.06、0.67±0.03、0.96±0.06、0.69±0.06,Ihh mRNA:0.77±0.05比0.98±0.05、1.09±0.05、1.27±0.03、1.46±0.06;PTHrp mRNA:0.67±0.07比0.97±0.05、1.07±0.08、1.37±0.05、1.45±0.05;Smo mRNA:0.45±0.03比0.63±0.04、0.71±0.05、0.81±0.01、1.00±0.02)均高于对照组(P0.05)。结论1、过量氟可导致关节软骨组织损伤;同时,低剂量的氟可促进软骨细胞增殖,而高剂量氟会导致软骨细胞凋亡。2、过量氟可刺激软骨组织及软骨细胞中Ihh、Smo、PTHrp的蛋白及其mRNA表达升高,证明体内及体外均存在Ihh信号通路表达,并受氟剂量的增多而升高。提示氟上调软骨中Ihh信号通路相关因子以及促进软骨细胞的增殖与凋亡可能共同参与软骨的损伤过程。
【学位授予单位】：贵州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R599.1

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本文编号：1294729