CNTFR在强直性脊柱炎中的表达变化及其对成骨细胞活性的影响

发布时间：2018-02-12 18:37

本文关键词： 强直性脊柱炎成骨细胞 CNTFR　出处：《第二军医大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：强直性脊柱炎(Ankylosing spondylitis,AS)是一种由多病因引起的复杂的疾病,可能与基因和环境等多种因素有关。强直性脊柱炎的患者大多数为年轻男性,其疾病特征为炎症和关节僵直,部位主要累及脊柱及外周关节。HLA-B27作为与强直性脊柱炎(AS)相关性最强的基因已经被研究了很多年,在过去的研究中虽取得了一定进步,但在寻找疾病易感基因方面的研究进展非常缓慢。和其他复杂性疾病如炎症性肠病相比,AS可被识别的易感基因非常少。ERAP1和IL23R的发现说明这些基因可能与关节僵直的发病有关。在全基因组学的相关研究中,辨别并证明相关基因及其变体是否与AS发病有关是一项非常难的挑战。成骨细胞在骨的形成以及骨的钙化中起着重要作用,并且调节着破骨细胞的分化。骨髓干细胞中Runx2转录因子的高表达,促使其分化为成骨细胞。成骨细胞调节破骨细胞的分化还通过巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF),细胞核因子Kappa-B受体活化因子配体(RANKL)和骨保护素(OPG)。巨噬细胞集落刺激因子使破骨细胞的前体细胞池扩大,并增加它们的存活率。细胞核因子Kappa-B受体活化因子配体是破骨细胞形成的必备分子,与破骨细胞前体细胞的RANK受体相互作用,从而促进破骨细胞的分化。骨保护素与细胞核因子Kappa-B受体活化因子配体相互作用,抑制破骨细胞的形成。其他影响成骨细胞-破骨细胞平衡关系的因子,还包括甲状旁腺激素(parathyroid hormone PTH)和前列腺素E2(prostaglandin E2 PGE2)。成骨细胞在骨形成过程中要经历成骨细胞增殖、细胞外基质成熟和细胞外基质矿化过程,成骨细胞成熟及细胞外基质成熟的重要标志之一是碱性磷酸酶的活性,可采用ALP试剂盒对细胞内的碱性磷酸酶活性进行检测。当阻断CNTF时,可以导致运动神经元的丢失和运动综合征,但是与VEGF丢失相比,它的损伤就相对较轻。在强直性脊柱炎的中枢神经系统损伤的区域,CNTF的表达相对性降低。另外在强直性脊柱炎病人的血清中,CNTF的水平逐渐升高,尤其是当腰椎受到侵犯时。在运动神经元损伤的小鼠模型中,皮下注射CNTF可以对运动神经元起到保护作用。CNTFR在骨骼肌和神经系统中广泛存在,在外周组织中,骨骼肌、皮肤、肺、肠、肾、肝、脾和胸腺中都表达CNTFR,其中以骨骼肌中表达含量最高。在中枢神经系统中,CNTFR表达在小脑,后脑、中脑、丘脑、下丘脑、纹状体、海马、皮质等部位,其中以小脑的表达最高。CNTFR由CNTFRa、糖蛋白(gpl30)和LIFRβ三种成分构成,其中CNTFRa是它的核心结构,分子量大约在52kD左右。糖蛋白(gpl30)在IL-6家族中起着信号传导的作用。LIFRβ是LIF的结合蛋白,LIFRβ的胞浆部分没有蛋白激酶活性和GTP结合位点,但并行排列的信-2-号传递体gpl30和lifrβ与jak-tyk激活有关,故gpl30、lifrβ与信号传导有关。我们通过基因芯片检测强直性脊柱炎病人与正常病人的基因表达差异,发现c7、c3、entpd3、hba2、fam70a、dsg2、angpt1、acvr1c、cntfr、fmo2、rergl、slpi、il7r、hp基因在强直性脊柱炎病人的髋关节韧带中表达较正常病人表达增加。pamr1、kcna1、fgfbp2、ppp4r4、crtac1、mamdc2、gpr64、galnt13、f5、nov、piezo2、lpar4、cdh13、itga11、q6zuq1、piezo2、arntl2、tnxb、nrk、gpsm2和htr2a基因在强直性脊柱炎病人的髋关节韧带中表达较正常病人表达降低。其中cntfr在骨骼肌和神经系统中广泛存在,且在强直性脊柱炎病人中表达也升高,另外,当阻断cntf时,可以导致运动神经元的丢失和运动综合征,强直性脊柱炎病人的血清中,cntf的水平逐渐升高,尤其是当腰椎受到侵犯时。在运动神经元损伤的小鼠模型中,皮下注射cntf可以对运动神经元起到保护作用。因此我们推测cntfr可能与强直性脊柱炎相关。成骨细胞在骨的形成以及骨的钙化中起着重要作用,并且调节着破骨细胞的分化,在强直性脊柱炎的发生发展中起着重要作用。成骨细胞成熟及细胞外基质成熟的重要标志之一是碱性磷酸酶的活性。因此用cntf处理激活cntfr,并用成骨细胞的碱性磷酸酶活性检测来观察cntfr是否与强直性脊柱炎相关,理论上是可行的。第一部分强直性脊柱炎病人髋关节韧带基因芯片的检测目的探索与强直性脊柱炎相关的基因方法我们对选取3例强直性脊柱炎病人和3例正常病人,取他们的髋关节韧带,将组织送予公司检测基因芯片,明确强直性脊柱炎病人与正常病人基因表达的差异。结果symbolgenebankfoldchangepamr1nm_001001991.20.29kcna1nm_000217.20.31fgfbp2nm_031950.30.31ppp4r4nm_020958.20.33crtac1nm_001206528.20.33mamdc2nm_153267.40.35gpr64nm_001079847.20.37galnt13nm_001301627.10.37f5nm_000130.40.39novnm_002514.30.4piezo2nm_022068.30.41lpar4nm_001278000.10.42cdh13nm_001220488.10.46itga11nm_001004439.10.46q6zuq1nm_001010917.20.46piezo2nm_022068.30.47arntl2nm_001248002.10.48tnxbnm_019105.60.49nrknm_198465.30.49gpsm2nm_013296.40.5htr2anm_000621.40.5c7nm_000587.22c3nm_000064.32.1entpd3nm_001248.32.12hba2nm_000517.42.12fam70anm_001104544.12.21dsg2nm_001943.32.23angpt1nm_001146.32.23acvr1cnm_001111031.12.26cntfrnm_001207011.12.37fmo2nm_001301347.12.49rerglnm_001286201.12.52slpinm_003064.32.88il7rnm_002185.32.95hpnm_001126102.14.65结论c7、c3、entpd3、hba2、fam70a、dsg2、angpt1、acvr1c、cntfr、fmo2、rergl、slpi、il7r、hp基因在强直性脊柱炎病人的髋关节韧带中表达较正常病人表达增加。pamr1、kcna1、fgfbp2、ppp4r4、crtac1、mamdc2、gpr64、galnt13、f5、nov、piezo2、lpar4、cdh13、itga11、q6zuq1、piezo2、arntl2、tnxb、nrk、gpsm2和htr2a基因在强直性脊柱炎病人的髋关节韧带中表达较正常病人表达降低。-4-第二部分验证强直性脊柱炎病人CNTFR基因的表达目的明确强直性脊柱炎病人CNTFR基因的表达方法分别取2例强直性脊柱炎病人的髋关节韧带作为实验组,和2例正常人的髋关节韧带作为对照组,用western-blot法检测CNTFR基因的蛋白质水平表达,比较两组的差异。结果western-blot法检测后发现,强直性脊柱炎病人髋关节韧带中CNTFR蛋白的条带颜色明显比正常人的髋关节韧带的深。结论强直性脊柱炎病人CNTFR基因的蛋白质水平表达明显升高第三部分CNTF处理对成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响目的明确CNTF处理对成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响方法在培养瓶中培养成骨细胞,当细胞融合度达到50%-70%时,进行铺板。将实验分为两组,一组为CNTF处理组,另一组为对照组,每组例数为6。在CNTF处理后24h根据碱性磷酸酶活性检测试剂盒上的说明书进行操作,检测碱性磷酸酶的活性。结果CNTF处理24h后,根据试剂说明书对成骨细胞碱性磷酸酶活性进行检测,发现CNTF处理组的碱性磷酸酶活性明显比对照组低(P0.01)结论CNTF可以降低成骨细胞碱性磷酸酶的活性,从而参与到了强直性脊柱炎的病程中。
[Abstract]:Ankyanite ( AS ) is a complex disease caused by multiple etiologies , which may be related to many factors , such as gene and environment . Most of the patients with ankylosing spondylitis have been studied for many years . CNTFR is the binding protein of LIF . In addition , CNTF has the highest expression in the central nervous system . In addition , CNTF is the binding protein of LIF . In addition , CNTFR is the binding protein of LIF . The expression of CNTF is about 52kD . The expression of cntfr in the joint ligaments of patients with ankylosing spondylitis has been increased . The expression of CNTFR gene in patients with ankylosing spondylitis was detected by western - blot .

【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R593.23

【共引文献】