小檗碱对脂肪胰岛素抵抗细胞PPARγ及脂肪分泌因子表达的影响

发布时间：2018-02-23 04:37

  本文关键词： 小檗碱 胰岛素抵抗 PPARγ 脂肪细胞因子 微滴数字PCR(ddPCR)　出处：《中国中药杂志》2016年11期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：脂肪分泌细胞因子与脂肪组织胰岛素抵抗(IR)密切相关,在糖尿病的发生发展研究中越来越受到重视。该实验主要研究小檗碱对脂肪胰岛素抵抗(IR)细胞PPARγ和脂肪分泌因子mRNA表达的影响,探讨小檗碱增强胰岛素敏感性的分子机制及微滴数字PCR(ddPCR)方法的应用优势。该实验采用ddPCR绝对定量分析简单直观确定合适的内参基因,ddPCR和荧光定量法(qPCR)方法比较研究不同剂量(10,20,50,100μmol·L-1)小檗碱干预IR 3T3-L1脂肪细胞中PPARγ、脂联素、抵抗素和瘦素mRNA表达;加入GW9662研究PPARγ和脂联素mRNA表达的内在关联。ddPCR结果发现β-actin在脂肪细胞中表达稳定,适合作为内参基因对定量PCR数据标准化。ddPCR和qPCR方法均显示与IR模型组相比,10,20,50,100μmol·L-1小檗碱呈现剂量依赖降低脂联素mRNA表达(P0.01)。对于PPARγ,qPCR显示20,50,100μmol·L-1小檗碱呈现剂量依赖降低其表达(P0.01),而ddPCR仅在50,100μmol·L-1降低其表达(P0.05)。PPARγ特异拮抗剂GW9662干预实验表明脂联素基因表达受PPARγ直接调控(P0.05)。ddPCR探针法检测到各剂量小檗碱均剂量依赖显著降低抵抗素和瘦素mRNA表达(P0.01)。结果揭示小檗碱调节脂联素起到胰岛素增敏作用并非通过PPARγ依赖途径在转录调控水平上调脂联素表达,推测可能是在翻译后调控水平上调高聚体脂联素比例。小檗碱下调抵抗素和瘦素表达减轻脂解改善IR。ddPCR比qPCR具有更好线性范围和灵敏度,对低丰度表达基因检测具有明显的技术优势。
[Abstract]:Adipose secreting cytokines are closely related to insulin resistance (IRR) in adipose tissue. The effect of berberine on the expression of PPAR 纬 and mRNA of adipose insulin resistance (IRR) cells was studied. To explore the molecular mechanism of berberine in enhancing insulin sensitivity and the advantages of the microdrop digital PCRD PCR method, the method of ddPCR absolute quantitative analysis was used to determine the suitable internal reference gene D PCR and the fluorescence quantitative method was compared with the method of fluorescence quantitative analysis. Different dosages of PPAR 纬 and adiponectin in IR 3T3-L1 adipocytes were treated with berberine at a dose of 100 渭 mol 路L ~ (-1). The expression of resistin and leptin mRNA and the expression of PPAR 纬 and adiponectin mRNA in adipocytes were studied by GW9662, and the expression of 尾 -actin was found to be stable in adipocytes. It is suitable for the standardization of quantitative PCR data as an internal reference gene. DdPCR and qPCR methods both show that berberine 1020 + 50 渭 mol 路L-1 berberine decreases adiponectin mRNA expression in a dose-dependent manner compared with IR model group. For PPAR 纬 -qPCR, 20 ~ 50 ~ 100 渭 mol 路L ~ (-1) berberine presents a dose-dependent reduction of its surface. The results showed that the expression of adiponectin gene was directly regulated by PPAR 纬 and the expression of P0.05 and mRNA was significantly decreased in a dose-dependent manner by the method of PPAR 纬 -direct regulation of adiponectin gene expression. The results showed that berberine decreased the expression of resistin and leptin mRNA in a dose-dependent manner. The results showed that the effect of berberine on insulin sensitivity was not regulated by PPAR 纬-dependent pathway at the transcriptional level. It is speculated that it is possible that the ratio of adiponectin is increased at the level of posttranslational regulation. Berberine down-regulates the expression of resistin and leptin to reduce the expression of resistin and leptin to improve IR.ddPCR, which has a better linear range and sensitivity than that of qPCR. It has obvious technical advantages for low abundance expression gene detection.
【作者单位】： 江西省中医病因学重点实验室江西中医药大学中医基础理论分化发展研究中心;
【基金】：国家自然科学基金项目(81460621) 江西省卫生厅中医药科研项目(2013A11) 江西省教育厅科研项目(GJJ14611)
【分类号】：R587.1

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本文编号：1526138