二甲双胍通过miR-1910-3p、miR-491-3p影响PCOS患者子宫内膜容受性的研究

发布时间：2018-02-24 09:10

本文关键词： 二甲双胍子宫内膜容受性 miRNAs 多囊卵巢综合征 HOXA10 ITGB3　出处：《郑州大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)是一种以生殖内分泌紊乱及一系列代谢异常为特征的全身性疾病,主要表现为稀发排卵或无排卵、临床或生化的高雄激素血症及影像学卵巢多囊性改变,部分伴有胰岛素抵抗(insulin resisitance,IR)、肥胖等,严重影响育龄期妇女的生育功能。妊娠成功的前提条件是胚胎植入子宫内膜,同时需要高质量的胚胎和容受性良好的内膜,以及二者之间进行复杂同步的相互作用。子宫内膜容受性(endometrial receptivity,ER),即内膜接纳胚胎的能力,人类子宫内膜在月经周期第19-23天接纳胚胎,这段时期称为胚胎的种植窗(window of implantation,WOI)。容受性好的子宫内膜存在良好的信号通路,促进胚胎细胞和子宫内膜基质之间的相互作用。诸多研究表明PCOS子宫内膜容受性受损影响胚胎着床,流产率增加。由于PCOS患者存在着胰岛素抵抗,而二甲双胍作为临床上最常用的胰岛素增敏剂,也被应用于PCOS患者。二甲双胍可提高细胞对于胰岛素的敏感性、改善组织器官的代谢功能,有报道显示二甲双胍可通过改善子宫内膜的容受性从而提高PCOS患者的妊娠率、降低流产率,但机制不清。子宫内膜容受性受多种分子及基因的表达调控,其中包括微小RNA(micro RNA,miRNA)。miRNA是一类非编码单链RNA分子,通过完全或非完全互补于靶基因的3'端非编码区域(3'-UTR),可在转录及转录后水平对m RNA和蛋白表达进行调控。miRNA参与子宫内膜容受性的建立和胚胎着床的过程。本课题组之前的研究发现,服用二甲双胍治疗PCOS不孕患者后妊娠率显著提高,流产率明显降低,且子宫内膜上容受性分子标志物HOXA10和ITGB3表达增加。同时服药组和对照组PCOS患者种植窗期子宫内膜miRNA存在差异性表达。猜想二甲双胍可能通过调控miRNA影响PCOS患者内膜上HOXA10和ITGB3的表达从而改善子宫内膜容受性。后应用miRDB和Target Scan数据库,预测并筛选出2个miRNA与HOXA10、ITGB3相关,miR-1910-3p和miR-491-3p。但究竟miRNA参与调控的具体机制如何,目前尚不清楚。本研究通过采用不同浓度二甲双胍及不同时间作用子宫内膜上皮细胞Ishikawa,观察药物对HOXA10和ITGB3表达的影响。通过研究miR-1910-3p、miR-491-3p在PCOS服药组和对照组子宫内膜中的表达以及其对HOXA10和ITGB3的影响,为评估子宫内膜容受性提供依据,同时为PCOS的临床治疗提供新思路。目的1.不同浓度及作用时间条件下二甲双胍对子宫内膜上皮细胞Ishikawa HOXA10和ITGB3表达的影响;2.检测miR-1910-3p和miR-491-3p在PCOS服药组和对照组原代子宫内膜上皮细胞中定量的表达;3.通过检测过表达miR-1910-3p和miR-491-3p后对子宫内膜上皮细胞Ishikawa HOXA10和ITGB3表达的影响,探讨miR-1910-3p和miR-491-3p与HOXA10和ITGB3的调控关系。方法1.通过Western-blotting检测不同浓度及作用时间条件下二甲双胍对子宫内膜上皮细胞Ishikawa HOXA10和ITGB3蛋白表达的影响;2.收集到的子宫内膜组织分离出原代子宫内膜上皮细胞,用RT-PCR的方法定量分析miR-1910-3p和miR-491-3p在PCOS患者服药组和对照组子宫内膜上皮细胞中的表达;3.通过转染miR-1910-3p和miR-491-3p的模拟物(mimic),建立其过表达的Ishikawa细胞模型。通过RT-PCR和Western-blotting检测miR-1910-3p和miR-491-3p表达水平的改变对子宫内膜标志物HOXA10和ITGB3的影响。结果1.二甲双胍可以以剂量依赖的形式增高子宫内膜上皮细胞中HOXA10和ITGB3的表达(P0.05);与未处理时细胞相比,二甲双胍处理12h、24h和48h后HOXA10和ITGB3的表达明显升高(P0.05),但无明显时间依赖关系,24h可能是二甲双胍的最佳作用时间;2.RT-PCR显示服用二甲双胍的PCOS患者较对照组子宫内膜上miR-1910-3p和miR-491-3p的表达显著减少(P0.05);3.Ishikawa细胞转染miR-491-3p的模拟物后,HOXA10和ITGB3 m RNA和蛋白表达水平均低于对照组(P0.001),而转染miR-1910-3p模拟物,HOXA10m RNA和蛋白表达水平低于对照组(P0.001),而ITGB3水平无明显变化(P0.05)。结论二甲双胍可显著增高子宫内膜上皮细胞Ishikawa中HOXA10和ITGB3的表达;miR-1910-3p和miR-491-3p在子宫内膜上皮细胞Ishikawa中抑制HOXA10和ITGB3的表达;二甲双胍改善子宫内膜容受性过程可能存在miR-1910-3p、miR-491-3参与调控。
[Abstract]:The polycystic ovary syndrome ( PCOS ) is a systemic disease characterized by reproductive endocrine disturbance and a series of metabolic abnormalities . It is mainly characterized by high androgenism and polycystic ovary polycystic ovary syndrome . The prerequisite for success of pregnancy is the ability of embryo to be implanted into the endometrium , with high quality embryo and tolerance . The human endometrium receives the embryo from 19 - 23 days of the menstrual cycle , which is called the window of implantation ( WOI ) . Metformin is the most commonly used insulin sensitizer in PCOS patients and is also used in PCOS patients . Metformin can improve the sensitivity of cells to insulin and improve the metabolic function of tissues and organs . It is reported that metformin can improve the rate of pregnancy in PCOS patients and reduce the rate of abortion . It is reported that metformin can regulate the expression of various molecules and genes , including micro RNA ( miRNA ) . Objective To investigate the effects of metformin on the expression of HOXA10 and ITGB3 in the endometrium of PCOS patients .

【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R711.75

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