维生素D与糖尿病微血管并发症的相关研究

发布时间：2018-03-05 05:03

  本文选题：2型糖尿病　切入点：微血管并发症　出处：《华中科技大学》2015年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的 探讨血清25(OH)D水平在糖尿病微血管并发症中的变化,分析血清25(OH)D水平与糖尿病微血管并发症(糖尿病周围神经病变、糖尿病视网膜病变和糖尿病肾病)的相关性,为早期预防及早期治疗糖尿病微血管并发症提供依据。方法于2013年1月-2013年8月收集石河子大学医学院第一附属医院内分泌代谢科2型糖尿病住院患者300例,选择健康体检者125人作为正常对照组,所有受试者均签署知情同意书。收集所有受试者的临床资料,采集空腹血样本检测25(OH)D及常规检查,包括Cr、Ca、P、HbA1c、TC、TG、LDL-c和HDL-c,收集2型糖尿病患者晨尿检测尿微量白蛋白／尿肌酐的比值(UACR),采用免散瞳眼底照相机对患者进行眼底检查,所有患者均接受神经症状／神经缺陷评分(NSS/NDS)和神经电生理检测。分析血清25(OH)D水平与糖尿病微血管并发症的关系。结果 1.2型糖尿病患者血清25(OH)D水平(50.10±29.90nmol/L)较正常对照组下降(69.25±31.20nmol/L),差异具有统计学意义(P0.05)。糖尿病组有74.7%的受试者存在血清25(OH)D缺乏,对照组有59.2%的受试者存在血清25(OH)D缺乏,差异具有统计学意义(P0.05)。两组在年龄、性别构成、TG、HDL-c、Cr、Ca和P无统计学差异(P0.05),而与对照组相比,糖尿病组BMI、SBP、DBP、TC和LDL-c均升高,差异有统计学意义(P0.05)。2.根据血清25(OH)D水平,将糖尿病患者分为25(OH)D缺乏组和25(OH)D正常组,比较相关临床指标,结果显示,两组在年龄、病程、SBP、DBP、FBS、TC、TG、 HDL-c、LDL-c和Cr均无统计学差异(P0.05)。25(OH)D缺乏组的糖尿病患者BMI和HbAlc高于25(OH)D正常组,差异有统计学意义(P0.05); 25(OH)D缺乏组的糖尿病患者合并DPN、DR和DN发生率高于25(OH)D正常组,差异具有统计学意义(P0.05)。3.合并DPN患者的血清25(OH)D水平(40.75±23.75nmol/L)较未合并DPN患者(54.50±24.50nmol/L)降低,合并DR患者的血清25(OH)D水平(41.55±26.00nmol/L)较未合并DR患者(54.75±26.25nmol/L)降低,合并DN患者的血清25(OH)D水平(42.35±26.83nmol/L)较未合并DN患者(53.90±22.14nmol/L)降低,差异均有统计学意义(P0.05)。4.糖尿病周围神经病变发生的影响因素分析：以是否合并DPN为因变量,单因素分析显示25(OH)D、病程、HbA1c、SBP.TC和LDL-c与DPN发病有关(P0.05),对入选的相关因素行Logistic逐步回归分析,结果显示,血清25(OH)D与DPN的发生呈负相关,是DPN的保护性因素,病程和HbA1c与DPN的发生呈正相关,是DPN的危险因素。5.糖尿病视网膜病变发生的影响因素分析：以是否合并DR为因变量,单因素分析显示25(OH)D、年龄、病程、BMI和HbA1c与DR发病有关(P0.05),对入选的相关因素行Logistic逐步回归分析,结果显示血清25(OH)D与DR的发生呈负相关,是DR的保护性因素,年龄与DR的发生呈正相关,是DR的危险因素。6.糖尿病肾病发生的影响因素分析：以是否合并DN为因变量,单因素分析显示25(OH)D、年龄、病程、HbA1c、SBP和LDL-c与DN发病有关(P0.05),对入选的相关因素行Logistic逐步回归分析,结果显示血清25(OH)D与DN的发生呈负相关,是DN的保护性因素,病程和SBP的发生呈正相关,是DN的危险因素。结论2型糖尿病及合并微血管并发症的患者体内血清25(OH)D水平下降,血清25(OH)D水平下降与糖尿病微血管并发症(糖尿病周围神经病变、糖尿病视网膜病变、糖尿病肾病)的发生密切相关。血清25(OH)D是糖尿病微血管并发症的保护性因素,补充维生素D是否能预防和改善糖尿病微血管并发症的发生及进展需进一步研究证实。目的 神经营养因子缺乏和氧化应激在糖尿病周围神经病变发生发展过程中起重要的作用,研究表明活性维生素D3[1,25(OH)2D3]具有神经营养和神经保护作用,前部分的研究结果表明维生素D缺乏与糖尿病周围神经病变的发生密切相关。然而,1,25(OH)2D3是否在糖尿病周围神经病变发病过程中起作用,目前尚不清楚。因此,本部分建立糖尿病周围神经病变大鼠动物模型,采用活性维生素D3[1,25(OH)2D3]干预,初步探讨活性维生素D3对糖尿病周围神经病变的保护作用及可能的机制。方法将30只雄性SD大鼠随机分为两组,正常组(CT)和模型组,后者采用60mg/kg的剂量腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,造模成功的标准为血糖≥16.7mmol/L将模型组大鼠再随机分为两组：糖尿病组(DM)及糖尿病+1,25(OH)2D3干预组(DM+VD3)。CT组和DM组予以生理盐水灌胃,DM+VD3组予以1,25(OH)2D3灌胃。每周检测空腹血糖,每4周检测坐骨神经运动传导速度。12周后将实验动物处死,取坐骨神经,观察各组大鼠坐骨神经病理变化,分别采用免疫组织化学法和、Western Blot检测神经营养因子NGF和NT-3,以及NADPH氧化酶P22phox和NF-κB p65蛋白表达水平。结果1.空腹血糖与同时间点CT组大鼠血糖比较,DM组和DM+VD3组大鼠在干预前及干预4周、8周和12周后的空腹血糖值均明显升高(P0.01)：与DM组大鼠比较,DM+VD3组大鼠干预4周和8周后空腹血糖值无明显统计学差异(P0.05),但干预12周后空腹血糖下降(P0.05);DM+VD3组大鼠空腹血糖在1,25(OH)2D3干预12周后比干预前下降,差异具有统计学意义(P0.05)。2.神经传导速度与同时间点CT组比较,DM组和DM+VD3组大鼠的坐骨神经运动传导速度均显著降低(P0.01);1,25(OH)2D3干预8周后,与同时间点的DM组比较,DM+VD3组大鼠的坐骨神经运动传导速度有所增长,但无明显统计学差异(P0.05)。干预12周后,DM+VD3组大鼠的坐骨神经运动传导速度高于同时间点的DM组,差异具有统计学意义(P0.05)。3.坐骨神经HE染色结果CT组大鼠坐骨神经纤维结构紧密、排列整齐、分布均匀,细胞结构完整,单个纤维饱满；DM组神经纤维排列疏松、间隙变大,多处发生变性及断裂；与DM组比较,DM+VD3组大鼠神经纤维结构较紧密,排列较整齐,变性与断裂减少。4.坐骨神经NGF的表达免疫组织化学结果显示：NGF在CT组大鼠坐骨神经雪旺细胞中表达呈强阳性,DM组坐骨神经NGF的阳性表达比CT组减少,DM+VD3组坐骨神经NGF的阳性表达高于DM组。图像处理分析结果显示,与CT组比较,DM组的积分光密度(IOD)值降低(P0.05)；与DM组比较,DM+VD3组的IOD值升高(P0.05)。Western Blot结果显示：与CT组比较,DM组大鼠坐骨神经组织NGF蛋白表达水平降低(P0.05);与DM组比较,DM+VD3组NGF蛋白表达水平升高(P0.05)。5.坐骨神经NT-3的表达免疫组织化学结果显示：NT-3在CT组大鼠坐骨神经雪旺细胞中表达呈强阳性,DM组坐骨神经NT-3的阳性表达比CT组减少,DM+VD3组坐骨神经NT-3的阳性表达高于DM组。图像处理分析结果显示,与CT组比较,DM组的IOD值降低(P0.05)；与DM组比较,DM+VD3组的IOD值升高(P0.05)。Western Blot结果显示：与CT组比较,DM组大鼠坐骨神经组织NT-3蛋白表达水平降低(P0.05)；与DM组比较,DM+VD3组NT-3蛋白表达水平升高(P0.05)。6.坐骨神经NADPH氧化酶P22phox的表达免疫组织化学结果显示：NADPH氧化酶P22phox主要表达于雪旺细胞中,阳性区域被染呈棕黄色。CT组大鼠坐骨神经NADPH氧化酶P22phox表达呈弱阳性；DM组大鼠坐骨神经NADPH氧化酶P22phox表达呈强阳性；DM+VD3组NADPH氧化酶P22phox的阳性表达低于DM组。图像分析结果显示,与CT组比较,DM组的IOD值增高(P0.05)；与DM组比较,DM+VD3组的IOD值降低(P0.05)。Western Blot结果显示：与CT组比较,DM组大鼠坐骨神经组织中的NADPH氧化酶P22phox蛋白表达水平升高(P0.05)；与DM组比较,DM+VD3组NADPH氧化酶P22phox蛋白表达水平降低(P0.05)。7.坐骨神经NF-κB p65蛋白的表达 免疫组织化学染色结果显示：NF-κB p65主要表达于坐骨神经雪旺细胞内,阳性区域被染呈棕黄色。CT组大鼠坐骨神经NF-κBp65表达呈弱阳性；DM组大鼠坐骨神经NF-κB p65表达呈强阳性；DM+VD3组NF-κBp65的阳性表达低于DM组。图像分析结果显示：与CT组比较,DM组的IOD值增高(P0.05)；与DM组比较,DM+VD3组的IOD值降低(P0.05)。Western Blot结果显示：与CT组比较,DM组大鼠坐骨神经组织中的NF-κB p65蛋白表达水平升高(P0.05),与DM组比较,DM+VD3组NF-κB p65蛋白表达水平降低(P0.05)。结论1,25(OH)2D3可降低DPN大鼠血糖水平,改善坐骨神经传导速度,保护坐骨神经形态,上调坐骨神经组织中NGF和NT-3蛋白表达水平,可能是其防治DPN的有效作用靶点之一。1,25(OH)2D3还可降低坐骨神经中NAPDH氧化酶P22phox的表达,对抗氧化应激;减少NF-κB的表达,从而起到神经保护作用。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R587.2

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