BLyS及其受体介导佐剂性关节炎大鼠异常免疫反应及新型活性单体CP-25的作用

发布时间：2018-03-07 12:28

本文选题：CP-25　切入点：滑膜细胞　出处：《安徽医科大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：肿瘤坏死因子配体超家族成员B淋巴细胞刺激因子(B lymphocyte stimulator, BLyS)又称B细胞活化因子,与其受体跨膜激活剂及钙调亲环素配体相互作用分子(transmembrane activator or calcium-modulating cyclophylin ligand-interactor, TACI)、B细胞成熟抗原(B cell maturation antigen, BCMA)和B细胞活化因子受体(B cell-activating factor receptor, BAFF-R)结合,促进B细胞的存活、生长、抗原呈递以及不同阶段免疫球蛋白的类别转换和重组,在B细胞存活、增殖和活化中起重要作用。BLyS主要来源于骨髓家族细胞如单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞等。活化的T细胞也产生BLyS,且表达BAFF-R和TACI两种受体,调节T细胞的功能,促进T细胞的活化和存活,在T细胞介导的自身免疫病中发挥重要作用。白芍总苷(total glucosides of paeonia,TGP)是我国第一个批准上市治疗RA抗炎免疫调节药,新型活性单体-苯磺酰芍药苷(芍药苷-6-氧-苯磺酸酯,代号CP-25)是TGP有效活性成份芍药苷(paeoniflorin, PAE)的结构修饰单体,脂溶性好,主要在小肠吸收,绝对生物利用度明显提高,抗炎免疫调节作用明显,已获中国发明专利(ZL 201210030616.4)。但CP-25对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)免疫应答和滑膜细胞调控作用的机制尚不清楚。本研究以大鼠佐剂性关节炎(adjuvant-induced arthritis, AA)模型为研究对象,观察BLyS及其受体在AA大鼠各免疫器官、免疫细胞和成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocyte, FLS)中的表达以及CP-25对大鼠AA的治疗作用；同时探讨了CP-25对T细胞和FLS功能及细胞间相互作用的调节和机制。目的：观察BLyS及其受体(BAFF-R、TACI、BCMA)在AA大鼠免疫器官、免疫细胞和FLS中的表达变化,明确CP-25对大鼠AA的治疗作用及其对T细胞和FLS功能及细胞间相互作用的影响。方法：SD大鼠右后足跖皮内注射完全弗氏佐剂(complete Freund adjuvant, CFA) 0.1ml建立大鼠AA模型。造模成功后,将大鼠随机分为八组：正常组,模型组,CP-25(25,50,100mg/kg)治疗组,甲氨蝶呤(MTX) (0.5mg/kg)、TGP (50mg/kg)和PAE (50mg/kg)阳性对照组。全身评分测定；光学显微镜观察脾脏组织病理学变化；Q-PCR检测BLyS及其受体(BAFF-R, TACI、BCMA)在脾脏、肠系膜淋巴结、巨噬细胞、树突状细胞和滑膜细胞中mRNA的表达；流式细胞术检测BAFF-R, TACI、BCMA在肠系膜淋巴结CD4+T细胞中的表达及脾脏辅助T(CD3+CD4+)、细胞毒T(CD3+CD8+)和未致敏(CD4+CD62L+)、记忆(CD4+CD44+) T细胞亚群的比例；CCK-8测定胸腺T细胞和FLS的增殖反应；ELISA法检测血清和细胞上清中IL-1β、IL-6和TNF-a水平。结果：1. BLyS及其受体BAFF-R、TACI、BCMA在AA大鼠免疫器官、免疫细胞和FLS中的表达Q-PCR法检测发现,与正常组相比,BLyS及其受体BAFF-R、BCMA mRNA在AA大鼠脾脏组织中表达明显升高,TACI mRNA表达无明显变化；BLyS及其受体BAFF-R mRNA在AA大鼠肠系膜淋巴结组织中表达明显升高,TACI mRNA表达明显降低,BCMA mRNA表达无明显变化；BLyS及其受体BAFF-R、BCMA mRNA在AA大鼠巨噬细胞中表达都明显升高,TACI mRNA表达明显降低；BLyS及其受体BCMA mRNA在大鼠AA树突状细胞中表达都明显升高,TACI mRNA表达明显降低,BAFF-R mRNA表达无明显变化；BAFF-R、BCMA mRNA在大鼠AA FLS中表达明显升高,TACI mRNA表达无明显变化。流式细胞仪检测发现,BAFF-R在淋巴结CD4+T细胞上表达升高,TACI表达无明显变化,BCMA无表达。2.CP-25体外对AA大鼠胸腺T细胞增殖的影响BLyS (500ng/ml)体外刺激48h能增强胸腺T细胞的增殖,CP-25(10-9,10-8,10-7,10-6,10-5 mol/L)给药组可以不同程度的抑制胸腺T细胞的增殖。3.CP-25体外对正常大鼠FLS和AA大鼠FLS增殖的影响BLyS (1μg/ml)体外刺激48h能增强正常和AA大鼠FLS的增殖,CP-25(10-,10-6,10-5 mol/L)给药组可以不同程度的抑制正常FLS的增殖,CP-25(10-7,10-6,10-5mol/L)给药组可以不同程度的抑制AA大鼠FLS的增殖。4. BLyS刺激的正常大鼠脾脏CD4+T细胞和AA大鼠FLS共培养对FLS增殖和分泌功能的影响及CP25的作用BLyS刺激48h的正常大鼠脾脏CD4+T细胞与AA大鼠FLS共培养可以使FLS增殖增强,分泌IL-1β、IL-6和TNF-α的水平升高；BLyS刺激正常大鼠脾脏CD4+T细胞同时给予不同浓度的CP-25,尔后将CD4+T细胞与AA大鼠FLS共培养,CP-25 (10-6,10-5 mol/L)可不同程度抑制FLS的增殖,CP-25(10-7,10-6,10-5 mol/L)可不同程度降低FLS的IL-1p水平,CP-25 (10-6,10-5 mol/L)可不同程度降低FLS的IL-6和TNF-α水平。5.CP-25对AA大鼠全身评分和脾脏病理学的影响CFA诱导大鼠AA模型,继发病变在造模后14天,表现为以多发性关节炎为特征的关节肿胀变形和活动障碍。AA大鼠脾脏病理学表现为动脉周围淋巴鞘和边缘区增厚,淋巴小结增多增大,生发中心出现。CP-25降低AA大鼠的全身评分,改善脾脏病理学表现。6.CP-25对AA大鼠脾脏T细胞亚群比例的影响与正常组相比,AA大鼠脾脏CD3+CD4+T细胞亚群比例明显升高,CP-25(50,100mg/kg)降低其比例；大鼠脾脏细胞毒CD3+CD8+T细胞亚群比例明显降低,CP-25 (100mg/kg)升高脾脏细胞毒CD3+CD8+T细胞亚群比例；AA大鼠脾脏记忆 (CD4+CD44+) T细胞亚群比例明显升高,CP-25 (50, 100mg/kg)降低脾脏记忆 (CD4+CD44+) T细胞亚群比例；大鼠AA脾脏未致敏(CD4+CD62L+) T细胞亚群比例无明显变化。7.CP-25对AA大鼠FLS上清炎性细胞因子分泌的影响与正常组相比,AA大鼠FLS上清中IL-1p和TNF-α水平显著升高,CP-25(50, 100mg/kg)明显降低IL-1p的水平,CP-25 (100mg/kg)可明显降低TNF-α的水平。结论：1. BLyS及其受体BAFF-R、TACI、BCMA在AA大鼠外周淋巴器官(脾脏、淋巴结)、免疫细胞(巨噬细胞、树突状细胞、CD4十T细胞)和FLS中异常表达,BLyS可能通过其受体介导了AA大鼠的异常T细胞反应。2.CP-25抑制CD4+T细胞和FLS的功能以及调节CD4+T细胞与FLS的相互作用,可能是其作用的机制之一。3.CP-25降低AA大鼠的全身评分,改善脾脏病理学损伤,调节T细胞平衡,对T细胞介导的大鼠AA有治疗作用。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R593.22

【参考文献】