1-磷酸鞘氨醇促进葡萄糖刺激的胰岛素分泌及其可能机制研究

发布时间：2018-03-07 11:17

  本文选题：1-磷酸鞘氨醇　切入点：葡萄糖刺激的胰岛素分泌　出处：《山西医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:研究1-磷酸鞘氨醇(Sphingosine-1-phosphate,S1P)促进葡萄糖刺激的胰岛素分泌效应及其分子机制,探索糖尿病治疗的药物作用靶点。方法:(1)断头处死大鼠,充分暴露胸腹腔,将胶原酶P经胆总管逆行注入胰腺,剥离后37℃水浴震荡消化11分钟,使用10771分离液梯度离心可获得胰岛。分离的胰岛经EDTA络合钙镁离子后,Diapase II消化5分钟,轻轻吹打后,可获得大鼠胰岛细胞(β细胞占多数)。(2)采用RT-PCR方法,检测大鼠胰岛细胞表面S1PR1-5表达情况。(3)在不同葡萄糖浓度的条件下,观察不同浓度S1P对胰岛β细胞分泌胰岛素的变化;高糖条件下,观察S1PR1-4阻断剂及S1P+S1PR1-4阻断剂对β细胞胰岛素分泌的变化。(4)采用膜片钳技术,观察S1P、S1PR1-4阻断剂及S1P+S1PR1-4阻断剂对电压依赖性钾电流(Kv电流)的影响。(5)采用钙成像技术,观察不同浓度S1P对细胞内Ca2+水平的影响。(6)观察S1P、S1PR1-4阻断剂、S1P+S1PR1-4阻断剂及Forskolin对细胞内cAMP水平的影响。结果:(1)经胶原酶P消化获得的大鼠胰岛,质地均一,边缘圆润;经Diapase II消化获得的胰岛细胞,大小均一,胞膜完整。(2)经RT-PCR检测,S1PR1-5在胰岛细胞表面均为阳性表达。(3)与低糖对照组相比,高糖对照组显著促进了胰岛素分泌。在低糖条件下,不同浓度S1P没有改变胰岛素分泌量(P0.05);而高糖条件下,S1P浓度依赖性促进了胰岛素的分泌(P0.001)。在高糖条件下,在单独S1PR1-4阻断剂并不影响胰岛素分泌的基础上,加入S1PR1-4阻断剂消除了S1P对胰岛素分泌的促进作用(P0.01)。(4)高糖条件下,S1P显著抑制了Kv电流(P0.01)。在单独S1PR1-4阻断剂不影响Kv电流的基础上,S1PR1-4阻断剂消除了S1P对Kv电流的抑制作用(P0.01)。(5)高糖条件下,S1P浓度依赖性升高了细胞内Ca2+浓度(P0.001)。(6)Forskolin作为阳性对照,S1P抑制了细胞内cAMP的生成(P0.01)。在单独S1PR1-4阻断剂不影响cAMP生成的基础上,S1PR1-4阻断剂消除了S1P对cAMP生成的抑制作用。结论:(1)用胶原酶P消化获得的胰岛、用Diapase II消化获得的胰岛细胞边缘圆润、状态良好。(2)胰岛细胞表面表达有S1PR1-5。(3)S1P通过S1P/S1PRs浓度依赖性促进了葡萄糖刺激的胰岛素分泌。(4)S1P通过S1P/S1PRs抑制了Kv电流。(5)S1P浓度依赖性升高了细胞内Ca2+浓度。(6)S1P通过S1P/S1PRs抑制cAMP的生成。综上,S1P主要通过S1P/S1PRs/Kv/Ca2+途径促进了胰岛素的分泌。
[Abstract]:Objective: to study the glucose-stimulated insulin secretion and its molecular mechanism of Sphingosine-1-phosphate S1P, and to explore the drug target of diabetic treatment. Collagenase P was retrograde injected into the pancreas through the common bile duct and digested by concussion at 37 鈩，

本文编号：1579064