Angiopoietin-1及L-mimosine对糖尿病大鼠肾脏固有细胞凋亡的影响

发布时间：2018-03-15 00:22

  本文选题：糖尿病肾病　切入点：细胞凋亡　出处：《遵义医学院》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：背景及目的:糖尿病肾病(DN)发生发展与肾脏微血管异常和慢性缺氧密切相关,而肾脏固有细胞凋亡在其进程中扮演重要作用。前期实验已证实促血管生成素-1(Ang-1)和抑制低氧诱导因子(HIF)降解可减轻糖尿病大鼠肾脏血管生成和缺氧相关因子异常表达,改善糖尿病肾脏微血管病变和缺氧状态。本研究旨在从细胞凋亡角度评估Ang-1、含羞草素(L-mimosine,HIF降解抑制剂)对糖尿病肾脏保护性作用。方法:构建Ang-1基因重组腺病毒载体(Ad-Ang-1)。采用腹腔一次性注射链脲菌素诱导SD大鼠糖尿病模型。设置正常对照组(N组)、DN组(D组)、空载腺病毒组(K组)、Ang-1干预组(A组)、L-mimosine干预组(L组)及Ang-1+L-mimosine联合干预组(AL组)。成模8W后,K组大鼠经阴茎静脉注射空白腺病毒载体(3×108 pfu/只),A组大鼠经阴茎静脉注射Ad-Ang-1(3×108 pfu/只),L组大鼠经腹腔注射L-mimosine(50mg/kg,隔日一次),AL组联用Ad-Ang-1及L-mimosine。在12W、16W末收集大鼠血、尿标本常规生化检测,同时处死大鼠,取出肾脏组织,HE及PAS染色观察肾脏病理,Western blot测定凋亡相关蛋白(cleaved CASP3、CASP3、BAX、BCL-2)的表达变化,TUNEL法观察肾脏固有细胞凋亡情况。结果:1.血糖、24h尿蛋白:5个糖尿病模型组血糖、24h尿蛋白均显著高于N组(P0.05),其中AL、L组24h尿蛋白低于D、A组(P0.05)。2.血肌酐、尿素:5个糖尿病模型组血肌酐、尿素水平较N组不同程度上升,且3个药物干预组之间无明显统计学差异(P0.05),其中血肌酐水平与D组亦无明显差异,而12w时血尿素水平却较D组升高(P0.01)。3.肾脏病理:5个糖尿病模型组可见不同程度的肾小球变形增大、系膜基质积聚、细胞总数增多、部分球囊扩张、肾小管管腔扩张及肾小管间质炎症细胞浸润,3个药物干预组病理改变相对减轻。4.肾组织细胞凋亡相关蛋白:(1)与N组相比,5个糖尿病模型组cleaved CASP3蛋白表达均明显上调(P0.01),而CASP3蛋白表达均明显下调(P0.01)。3个药物干预组cleaved CASP3蛋白表达显著低于D组(P0.01),而CASP3蛋白表达显著高于D组(P0.01),且3个药物干预组间cleaved CASP3、CASP3蛋白表达无统计学差异(P0.05)。(2)5个糖尿病模型组BAX蛋白表达较N组均明显上调(P0.01),其中3个药物干预组BAX蛋白表达显著低于D组(P0.01),且3个药物干预组间BAX蛋白表达无统计学差异(P0.05)。(3)5个糖尿病模型组BCL-2蛋白表达较N组均显著下调(P0.05),其中3个药物干预组BCL-2蛋白表达显著高于D组(P0.05),且3个药物干预组间BCL-2蛋白表达无统计学差异(P0.05)。(4)5个糖尿病模型组BAX/BCL-2比值较N组均明显上调(P0.01),其中3个药物干预组BAX/BCL-2比值低于D组(P0.01),且3个药物干预组间BAX/BCL-2比值无统计学差异(P0.05)。5.肾组织细胞凋亡率:细胞凋亡主要表现在肾小管上皮细胞,其次系膜细胞;5个糖尿病模型组细胞凋亡率较N组均明显升高(P0.01),其中3个药物干预组细胞凋亡率显著低于D组(P0.01),且3个药物干预组间细胞凋亡率无统计学差异(P0.05)。6.Pearson相关性分析:Cleaved CASP3、BAX的表达及BAX/BCL-2比值与肾脏固有细胞凋亡率呈显著正相关(r=0.963、0.927、0.962,P0.01),而CASP3、BCL-2的表达与肾脏固有细胞凋亡率呈显著负相关(r=-0.967、-0.940,P0.01)。结论:Ang-1和或L-mimosine可降低糖尿病大鼠肾脏固有细胞凋亡,且与改善细胞凋亡相关蛋白的表达相关。Ang-1和L-mimosine单用或联用无明显差异。
[Abstract]:Background and objective: diabetic nephropathy (DN) and the occurrence and development of renal microvascular abnormalities and chronic hypoxia is closely related to apoptosis in renal cell and play an important role in the process. Previous studies have demonstrated that Ang -1 (Ang-1) and inhibition of hypoxia inducible factor (HIF) degradation can reduce renal vascular generation in diabetic rats and the abnormal expression of hypoxia related factors, improve the renal microvascular disease in diabetic and hypoxic condition. The purpose of this study was to evaluate Ang-1 from the aspect of apoptosis, mimosine (L-mimosine, HIF degradation inhibitor) on diabetic kidney protective effect. Methods: to construct the recombinant adenovirus vector containing Ang-1 gene (Ad-Ang-1) by intraperitoneal injection of streptozotocin. Streptozotocin induced diabetic rat model of SD. The normal control group (N group), DN group (D group), empty adenovirus group (K group), Ang-1 group (A group), L-mimosine group (group L) and Ang-1+L-mim osine鑱斿悎骞查�勭唬�

本文编号：1613613