高脂环境下大鼠BMSCs成骨分化过程中Wnt通路相关因子的表达变化

发布时间：2016-11-02 19:27

  本文关键词：高脂环境下大鼠BMSCs成骨分化过程中Wnt通路相关因子的表达变化，由笔耕文化传播整理发布。

《山东大学》 2015年

高脂环境下大鼠BMSCs成骨分化过程中Wnt通路相关因子的表达变化

李慧垠  

【摘要】：背景：高脂血症与骨质疏松症发病率日益增加,众多研究表明两者联系密切,然而两者之间的具体发病机制仍不清楚。Wnt信号通路为近年来骨代谢研究热点。目的：观察高脂环境下大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)成骨分化过程中Wnt信号通路相关因子的表达变化,以期探讨高脂血症导致骨质疏松的可能机制。方法：Wistar大鼠BMSCs进行培养及传代,采用第三代细胞用于实验。待第三代细胞融汇至80%后,实验分为两组：高脂组、对照组,每组有三个样本,两组细胞向成骨诱导期间倒置显微镜观察细胞的形态变化；成骨诱导5天、7天、14天碱性磷酸酶(ALP)活性检测观察两组BMSCs早期成骨细胞分化情况；28天茜素红染色观察细胞外基质矿化能力；成骨诱导14天油红O染色观察两组BMSCs成脂分化情况；成骨诱导培养7天、14天、21天采用RT-PCR检测两组细胞Wnt信号通路相关因子Wnt3a、LRP5、β-catenin、 sFRP1 mRNA的表达,以及脂肪代谢因子PPAR-y mRNA的表达；同时7天、14天、21天Western Bolt检测两组细胞β-catenin的蛋白表达量。SPSS17.0对数据进行统计分析。结果：BMSCs培养到第三代,细胞形态趋于一致。ALP活性检测显示其活性随时间延长而增大,但增长速度减慢,7天、14天高脂组活性均低于对照组。茜素红染色结果显示对照组钙结节量形成多于高脂组。油红O结果显示高脂组中红染的脂肪细胞多于对照组。RT-PCR结果显示在7天时sFRP1、PPAR-γ表达量对照组低于高脂组,差异有显著意义(p0.01),14天时Wnt3a、β-catenin表达量对照组高于高脂组(p0.05), sFRP1、PPAR-y表达量对照组低于高脂组,差异有意义(p0.01),21天时LRP5、β-catenin表达量对照组高于高脂组,有统计学意义(p0.01)。Western Blot结果显示,在第14天、21天高脂组较对照组β-catenin蛋白的表达明显下调,差异有统计学意义(p0.05)。结论：1.高脂环境下BMSCs向成骨细胞分化减少。2.不同时间段Wnt信号通路相关因子的表达变化不一致,成骨分化早期sFRP1起作用,成骨分化中期Wnt3a起作用,β-catenin在成骨分化中末期发挥效应,LRP5在成骨分化末期变化显著,其具体原因需进一步探讨。3.Wnt信号通路参与BMSCs成骨细胞分化过程中,其相关因子之间联系密切,高脂环境下,Wnt信号通路中的Wnt3a、LRP5、p-catenin受到一定程度的抑制,sFRP1以及PPAR-y激活,这也许是高脂血症导致骨质疏松的原因之一。

【关键词】：
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R783;R580;R589.2
【目录】：

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