血管周围脂肪在糖尿病大鼠血管内皮损伤修复中的作用及机制研究
本文选题：3T3-L1前脂肪细胞 切入点：成熟脂肪细胞 出处：《北京协和医学院》2017年博士论文
【摘要】：目的观察诱导剂作用时间对3T3-L1前脂肪细胞系分化的影响。方法参照传统“鸡尾酒”法,分别在作用时间为2(传统法)、3、4天(后两者称改良法)条件下诱导分化。倒置显微镜观察细胞形态,油红0染色及甘油三酯检测脂肪含量。结果传统法脂肪细胞转化率大于80%者占65%,而改良法转化率大于80%者为100%(P0.05)。4天组细胞脂肪含量高于2、3天组(1402.5±9.4vs.1078.5±15.2或1083.4±9,6 ng/mL,P0.05),而 2 与 3 天组间无明显区别(1078.5±15.2 vs.1083.4±9.6ng/mL,P0.05)。结论改良法3T3-L1前脂肪细胞诱导法可提高脂肪细胞转化率,可作为高效制作脂肪细胞模型的方法之一。优选地,推荐作用时间为3天的改良法诱导方案。目的高糖可导致血管内皮细胞功能紊乱,脂肪细胞具有强大的内分泌功能,参与多种病理生理过程,该研究的主要目的是观察脂肪细胞对高糖刺激下人脐静脉内皮细胞功能的影响。方法该实验以人脐静脉内皮细胞为研究对象,实验共分为3组:正常对照组(A)、高糖刺激组(B)、高糖刺激+3T3-L1脂肪细胞共培养组[C)。以Tubilin作为内参,采用Western blot和rt-PCR方法检测人脐静脉内皮细胞中ICAM-1、OPN、eNOS表达。结果B组人脐静脉内皮细胞eNOS表达显著低于A组和C组(P0.05),C组eNOS表达低于A组(P0.05)。相反,B组人脐静脉内皮细胞ICAM-1、OPN表达明显高于A组和C组(P0.05),而A组和C组间ICAM-1、OPN表达无显著差异(P0.05)。结论高糖刺激可导致人脐静脉内皮细胞功能紊乱,脂肪细胞可通过上调eNOS表达、下调ICAM-1、OPN表达从而减低高糖对人脐静脉内皮细胞的损害。目的探索血管周围脂肪组织在糖尿病大鼠血管内皮损伤修复中的作用。方法SD雄性大鼠为研究对象,实验共分为3组:空白对照组(A组)、糖尿病+颈动脉球囊损伤组(B组)、糖尿病+颈动脉球囊损伤+血管周围脂肪组织移植组(C组),采用Western Blot、rt-PCR及免疫组化技术检测大鼠颈动脉组织中ICAM-1、OPN、eNOS表达情况,同时行HE染色观察颈动脉内膜增生情况。结果HE染色结果显示B组颈动脉内-中膜厚度明显高于A组(p0.05),而C组与A组间无显著差异(p0.05)。Western blot、rt-PCR及免疫组化结果均显示,B组大鼠颈动脉eNOS表达显著低于A、C两组(p0.05),而ICAM-1、OPN表达则显著高于A、C两组(p0.05)。结论血管周围脂肪组可促进糖尿病大鼠血管内皮修复,ICAM-1及OPN有望成为糖尿病所引起血管疾病的潜在治疗靶点。
[Abstract]:Objective to observe the effect of induction time on the differentiation of 3T3-L1 preadipoid cell line. The cells were induced to differentiate under the condition of 2 (3 ~ 4 days) of the traditional method respectively. The morphology of the cells was observed by inverted microscope. Oil red 0 staining and triglyceride were used to detect the fat content. Results in the conventional method, the adipocyte conversion rate was more than 80%, while in the modified method, the fat content in the 100%(P0.05).4 day group was higher than that in the 2g / 3 day group (1402.5 卤9.4vs.1078.5 卤15.2 or 1083.4 卤9ngmL / L ~ (-1) P 0.05), while in the modified method > 80%, the fat content was higher than that in the 2ngL / L group. There was no significant difference between the 3 day groups (1078.5 卤15.2 vs.1083.4 卤9.6 ng 路mL ~ (-1) P 0.05). Conclusion the improved 3T3-L1 preadipocyte induction method can increase the adipocyte transformation rate. It can be used as one of the effective methods to make adipocyte model. An improved induction method with 3 days' action is recommended. Objective High glucose may lead to dysfunction of vascular endothelial cells, and adipocytes have strong endocrine function. The main purpose of this study was to observe the effect of adipocytes on the function of human umbilical vein endothelial cells stimulated by high glucose. The experiment was divided into three groups: normal control group, high glucose stimulation group, high glucose stimulation group, 3T3-L1 adipocyte co-culture group. Tubilin was used as internal control. Western blot and rt-PCR were used to detect the expression of eNOS in human umbilical vein endothelial cells. Results the expression of eNOS in human umbilical vein endothelial cells in group B was significantly lower than that in group A and group C (P 0.05). On the contrary, the expression of eNOS in group B was lower than that in group A (P 0.05). In contrast, the expression of ICAM-1OPN in human umbilical vein endothelial cells in group B was significantly lower than that in group C (P 0.05). The expression of ICAM-1OPN was significantly higher in group A and C than that in group A and C, but there was no significant difference in the expression of ICAM-1OPN between group A and group C. conclusion High glucose stimulation may lead to dysfunction of endothelial cells in human umbilical vein. Adipocytes can up-regulate the expression of eNOS. Objective to explore the role of perivascular adipose tissue in the repair of vascular endothelial injury in diabetic rats. The experiment was divided into three groups: blank control group (group A), diabetic carotid artery balloon injury group (group B), diabetic carotid artery balloon injury group (group C) and adipose tissue transplantation group (group C). Western blottt- PCR and immunohistochemical technique were used to detect the results. The expression of ICAM-1OPNnnnnongnos in carotid artery of rats, Results the intima hyperplasia of carotid artery in group B was significantly higher than that in group A (P 0.05), but there was no significant difference between group C and group A. Western blottir rt-PCR and immunohistochemistry showed that the thickness of carotid intima in group B was significantly higher than that in group A. The expression of eNOS in carotid artery in group A was significantly lower than that in group A and C, while the expression of eNOS in group ICAM 1 was significantly higher than that in group A and C. Conclusion the expression of ICAM-1 and OPN in perivascular fat group can promote vascular endothelial repair in diabetic rats. A potential therapeutic target.
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R587.2
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，本文编号：1680178
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