应用高通量蛋白芯片技术筛选白塞病和IgG4相关性疾病血清标志物的研究

发布时间：2018-03-30 21:36

  本文选题：白塞病　切入点：IgG4相关性疾病　出处：《北京协和医学院》2015年博士论文

【摘要】：白塞氏病(BD)是一种病因不明、复发性、常见的系统性自身免疫病。以口腔溃疡、生殖器溃疡、血管炎、眼炎,进而引起感染、失明、动脉瘤等严重后果为主要特征,其临床表现复杂,给患者造成极大痛苦,严重影响患者生活质量。研究表明,我国白塞病发病率明显高于其他地区,为美洲地区的14倍。临床早期诊断积极治疗可让BD患者获益匪浅,但是,目前尚无诊断BD的可靠血清标志物,其诊断主要靠非特异性的临床表现,需要与多种自身免疫病鉴别,许多BD患者得不到及时正确诊断和治疗。本研究采用包含21065种非冗余重组人源蛋白质的高通量蛋白芯片技术对40例BD患者,15例自身免疫病对照患者和20例正常对照进行BD相关自身抗体靶抗原的筛查。经分析确定筛选出36个BD相关自身抗体靶抗原。为了确认这些BD相关自身抗体的敏感性和特异性及临床应用价值,随后采用36个BD相关自身抗体对应靶抗原构建制备BD相关自身抗体靶抗原蛋白芯片对130例BD患者,103例自免病对照患者(包括大动脉炎患者40例,ANCA相关血管炎患者40例和SS患者23例)和正常对照110例血清进行临床扩大样本验证。研究结果显示抗CTDP1抗体[RNA聚合酶Ⅱ亚基AC-末端结构域磷酸酶(RNA polymerase Ⅱ subunit A C-terminal domain phosphatase)]在BD患者中的阳性率为23.85%,显著高于自身免疫病对照组4.85%(X2=15.87,P=6.79×10-5)和正常对照6.4%(X2=13.67,P=0.000218)中的阳性率,结果差异具有显著性。其余35种高密度蛋白芯片筛出的BD相关自身抗体经扩大样本验证,结果显示在BD组、自身免疫病对照组和健康对照组间阳性率差异无显著性。免疫印迹检测结果证实采用BD自身抗体靶抗原芯片大样本验证确认的抗CTDP1抗体是BD患者血清中存在的特异性自身抗体。IgG4相关性疾病(IgG4-RD)是近年来新认识的一种多器官受累自身免疫病,以受累器官组织增生、肿大、IgG4阳性淋巴细胞浸润,血清IgG4水平显著增高为主要特征,但血清IgG4升高并非该病的特异性指标。由于近年来过于强调血清IgG4的浓度增高和组织IgG4阳性细胞在IgG4相关疾病诊断中的作用,导致误诊为IgG4相关疾病的患者越来越多。本研究采用包含21065种非冗余重组人源蛋白质的高通量蛋白芯片技术对30例IgG4相关性疾病患者和30例正常对照进行IgG4相关性疾病相关自身抗体标志物的筛查,IgG4相关性疾病组的平均阳性蛋白点数为68.8±72.3,低于正常对照组的平均阳性蛋白点数234.4±372.4。为保证临床特异性,设定正常对照组中的阳性率低于6.67%(2/30)的条件下,IgG4相关性疾病相关标志物的阳性率都≤20%,其临床应用价值有限,因此本研究不再制备IgG4相关性疾病相关自身抗体靶抗原蛋白芯片进行扩大样本筛选验证。本研究结果揭示IgG4相关性疾病患者体内增高的IgG4针对21065种重组人源蛋白低反应性的现象为IgG4相关性疾病的研究提出了另一个崭新的话题：IgG4相关性疾病患者体内的自身免疫是否异常?我们将进一步对IgG4相关性疾病患者血清IgG4进行氨基酸序列分析,从蛋白水平证实IgG4相关性疾病患者血清IgG4是否是寡克隆免疫球蛋白?另一方面,对IgG4相关性疾病患者IgG4+浆母细胞进行单细胞测序,从核酸层面研究证实是否IgG4相关性疾病患者IgG4+浆母细胞为寡克隆细胞。本研究结果表明,采用高密度蛋白芯片技术进行小样本筛选与制备疾病相关标志物小芯片进行扩大样本验证和免疫印迹技术进行疾病特异性标志物方法学验证相结合是进行自身免疫病患者血清自身抗体标志物研究的有效方案。
[Abstract]:In order to confirm the sensitivity and specificity and clinical application value of BD - related autoantibodies , the results showed that the anti - CTDP1 antibody against BD - related autoantibodies was significantly higher than that in other regions . In order to ensure clinical specificity , the positive rate of the relevant markers in the normal control group was lower than 6.67 % ( 2 / 30 ) .

【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R597.9

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本文编号：1687729