Apelin对葡萄糖毒性作用及胰岛细胞PDX-1蛋白表达的影响

发布时间：2018-04-10 07:16

  本文选题：Apelin-36　切入点：胰岛素　出处：《广西医科大学》2015年硕士论文

【摘要】：目的：1.探讨Apelin是否通过参与葡萄糖毒性作用机制引起胰岛素释放减少。2.研究Apelin与PDX-1蛋白合成的关系。方法：复苏并培养好的胰岛β细胞株小鼠NIT-1细胞接种于25ml培养瓶(1×107cells/瓶),在各不同浓度葡萄糖的含血清RPMI 1640培养液中培养3天。随机分组如下：(1)正常对照组1：葡萄糖的浓度为5.6 mmol/L。(2)正常对照组2：葡萄糖的浓度为5.6 mmol/L+Apelin-36(1μmol/L)。(3)高糖组1：葡萄糖的浓度为16.7mmol/L。(4)高糖组2：葡萄糖的浓度为16.7mmol/L+Apel in-36(1μmol/L)。(5)极高糖组1：葡萄糖的浓度为33.3mmol/L。(6)极高糖组2：葡萄糖的浓度为33.3mmol/L+Apelin-36(1μmol/L)。然后进行：1.基础Ins释放试验：将各组胰岛β细胞移到1 ml离心管(1×106cells/管)中,预孕育在HBSS液(37℃孕育60分钟)中,用PBS洗涤2次后,在含葡萄糖浓度为5.6 mmol/L的HBSS缓冲液中37℃预孕育60min,弃掉缓冲液,然后将细胞置于1 ml含葡萄糖浓度为5.6 mmol/L(基础)和葡萄糖浓度为16.7mmol/L(葡萄糖刺激)的HBSS缓冲液中37℃育1 h,收集反应液,然后用ELISA法测定Ins含量。2.细胞内Ins含量测定：取各组培养好的小鼠NIT-1细胞到1ml离心管(1×106cells/管),进行反复的冷冻溶解破碎然后以酸化乙醇溶液进行抽提,4℃孵育16～24 h,用ELISA法测定Ins含量。3.PDX-1蛋白的表达：收集各组NIT-1细胞进行涂片,用4%的多聚甲醛溶液固定20 min, PBS冲洗3次每次3min,按照S/P免疫组化试剂盒的说明书进行操作。在显微镜下计算各组细胞的阳性细胞数。4.PDX-1mRNA的表达：取各组新鲜的小鼠NIT细胞涂片,用4%多聚甲醛/0.1%DEPC/0.1mmol/LPBS (pH 7.2～7.6)固定20-30min,按照PDX-1原位杂交试剂盒的说明书进行操作,在显微镜下计算各组细胞的阳性细胞数。结果：①与正常组1比较,高糖组1和极高糖组1的基础和刺激后胰岛素分泌、细胞内胰岛素均明显减少(P0.05)：②加Apelin的正常组2的基础和刺激后胰岛素分泌、细胞内胰岛素与正常组1相比,无明显差异(P0.05)；③加Apelin的高糖组2和极高糖组2的细胞内胰岛素、基础和刺激后胰岛素分泌分别较高糖组1和极高糖组1明显下降(P0.05)；④与正常组1比较,高糖组1和极高糖1的PDX-1蛋白表达下降(P0.05)；⑤加Apelin的正常组2的PDX-1蛋白表达与正常组1相比,无明显差异(P0.05)；⑥加Apelin的高糖组2和极高糖组2的PDX-1蛋白表达分别较高糖组1和极高糖组1明显下降(P0.05)；⑦各浓胰岛素水平与PDX-1蛋白表达呈正相关,与PDX-1mRNA表达无关；⑧各组间PDX-1mRNA表达差异无统计学意义(P0.05)。结论：Apelin可能通过降低PDX-1蛋白表达,参与葡萄糖毒性作用,引起胰岛素分泌减少,从而在糖尿病的发病机制中发挥作用。
[Abstract]:Purpose 1.To investigate whether Apelin can induce insulin release decrease by taking part in glucose toxicity mechanism. 2. 2.To study the relationship between Apelin and PDX-1 protein synthesis.Methods: the NIT-1 cells of mouse islet 尾 cell line were inoculated into 25ml culture flask (1 脳 107cells/) and cultured in serum RPMI 1640 culture medium with different concentrations of glucose for 3 days.The concentration of glucose was 33.3 mmol / L 路L ~ (-6). The concentration of glucose was 33.3mmol/L Apelin-36(1 渭 mol / L ~ (-1).Then proceed to 1: 1.Basal Ins release test: the islet 尾 cells in each group were transferred to 1 ml centrifuge tube (1 脳 106cells/ tube), preinoculated in HBSS solution at 37 鈩，

本文编号：1730201