松弛素和白藜芦醇在体外高糖环境诱导心肌细胞肥大的作用机制研究

发布时间：2018-04-15 20:28

本文选题：松弛素 + 白藜芦醇　；参考：《重庆医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:本研究旨在探讨松弛素和白藜芦醇对高糖诱导的H9C2心肌细胞肥大的影响及其可能分子机制。方法:培养大鼠H9C2心肌细胞,建立体外高糖损伤模型,实验分为两部分,第一部分将H9C2心肌细胞分为正常糖浓度对照组(NG组)、高糖组(HG组)、松弛素组(HG+RLX组)、松弛素+Notch1拮抗剂组(HG+RLX+DAPT组)。用CCK8法检测细胞存活率,AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,罗丹明标记的鬼笔环肽检测细胞表面积,DCFH-DA荧光染色法检测细胞内活性氧(ROS)水平,比色法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)水平,实时荧光定量PCR检测Notch1、hes1、ANP、BNP基因表达情况,Western blot检测Notch1、hes1、ANP、BNP、MnSOD、cytochrome c和caspase 3蛋白表达情况。第二部分将H9C2心肌细胞分为正常糖浓度组(NG组)、高糖组(HG组)、白芦藜醇组(HG+Res组)和白藜芦醇+DAPT组(HG+Res+DAPT组)。用鬼笔环肽检测细胞表面积,DCFH-DA法检测细胞内活性氧簇(ROS)水平,比色法检测SOD、MDA水平,实时荧光定量PCR及Western blot检测Notch1、hes1、ANP、BNP mRNA和蛋白表达。结果:第一部分:CCK8和AnnexinV/PI染色结果显示,与NG组相比,HG组细胞存活率降低,凋亡率升高,而RLX干预后可显著降低凋亡率,并呈浓度和时间依赖性增加细胞存活率。细胞表面积结果显示,与NG组相比,HG组心肌细胞表面积增大,而RLX干预后心肌肥大得到明显改善。酶学检测结果显示,与NG组相比,HG组细胞ROS和MDA含量显著升高,SOD活性显著降低,而RLX干预后可增加SOD活性,降低ROS和MDA含量。q RT-PCR及Western blot结果显示,与NG组相比,HG组Notch1、hes1和MnSOD表达下降,ANP、BNP、cytochrome c和caspase 3表达增加,RLX干预后可逆转上诉效应,但上述保护作用可被Notch1拮抗剂消除。第二部分:与NG组相比,HG可诱导心肌细胞肥大,ROS和MDA含量增加,SOD活性下降,伴随ANP和BNP基因及蛋白表达增加,Notch1和hes1表达下降,白藜芦醇处理后可逆转心肌细胞肥大,减轻ROS和MDA氧化损伤,增加SOD活性,抑制ANP和BNP表达,增加Notch1及hes1表达。结论:松弛素可能通过活化Notch1信号通路保护高糖诱导的心肌肥大和凋亡,且可能与减少氧化应激损伤有关。此外,白藜芦醇可能也通过改善氧化应激,活化Notch1/hes1信号通路抑制高糖引起的H9C2心肌细胞肥大。
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【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R587.2;R54

【参考文献】