1、VEGF在糖尿病大鼠肾脏中表达情况及莱菔硫烷对其干预作用的研究

发布时间：2016-11-17 01:32

  本文关键词：Nrf2、HO-1、VEGF在糖尿病大鼠肾脏中表达情况及莱菔硫烷对其干预作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

《河北医科大学》 2015年

Nrf2、HO-1、VEGF在糖尿病大鼠肾脏中表达情况及莱菔硫烷对其干预作用的研究

李琳  

【摘要】：目的:糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病(diabetes mellitus,DM)最常见、最严重的微血管并发症之一,已成为终末期肾病(end stage renal disease,ESRD)的主要原因之一。研究显示DN的发病机制与糖代谢紊乱、血流动力学改变、内皮细胞功能障碍、炎症、氧化应激及自噬等多种因素有关,糖尿病并发症病理学的统一机制学说的提出,充分体现了高糖诱导的氧化应激在DN发生发展中的重要作用。近年来,诱导机体细胞的自然保护反应正引起关注,即转录因子NF-E2相关的因子2(Nrf2)与其负调控蛋白Keap1共同调控的II相酶的表达,被认为是细胞抵御氧化应激的最主要途径。本研究通过建立糖尿病大鼠模型,测定肾组织中丙二醛(MDA)含量及总抗氧化能力(T-AOC)反应糖尿病大鼠肾脏氧化应激程度;应用免疫组织化学、荧光定量PCR等方法检测肾组织的Nrf2、HO-1、VEGF的表达情况;并给予II相酶诱导剂莱菔硫烷(sulforaphane,SF)进行干预,观察其对肾脏MDA、T-AOC、Nrf2、HO-1、VEGF表达影响;探讨Nrf2/ARE通路与DN氧化应激的关系以及莱菔硫烷的干预效果,旨在为糖尿病肾病的防治提供实验性理论依据。方法:清洁级健康雄性SD大鼠36只,体重200±20 g,按随机数字法分为:正常对照组(NC组)、糖尿病模型组(DM组)、药物干预组(DM+SF组),每组12只,其中DM组及DM+SF组给予腹腔一次性注射链脲佐菌素(STZ)65 mg/kg(溶于0.1 mol/L柠檬酸缓冲液中,PH 4.2),72 h后尾尖取血测定血糖,以血糖≥16.7 mmol/L,尿糖+++~++++,作为糖尿病模型成功的标志,NC组给予等量柠檬酸缓冲液腹腔注射。实验期间动物自由进食、饮水,不使用降糖药物。DM+SF组予以SF500μg/kg(溶于植物油中),灌胃,1次/日;NC组、DM组予以等量的植物油灌胃,1次/日。分别于实验的第8周、第12周每组随机取6只大鼠称重后分别用代谢笼收集24 h尿,用于测定尿蛋白定量。心脏取血测定血糖、肌酐、尿素氮。留取肾组织标本用于制作肾皮质匀浆测定MDA及T-AOC浓度。制备病理组织切片并进行HE、PAS染色明确肾脏病理变化。应用免疫组织化学及荧光定量PCR方法检测Nrf2、HO-1、VEGF在肾脏的表达部位并对其进行定量检测。对于满足正态方差齐的数据采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)进行统计学处理,非正态或方差不齐时采用多个独立样本的秩和检验。P0.05表示有统计学意义。结果:1一般情况:NC组大鼠饮食及尿量无明显变化,毛发光泽,反应灵敏,体重明显增长;DM组及DM+SF组逐渐出现多饮、多尿、多食、毛发枯黄,体重相对于同期NC组大鼠明显下降(P0.05);但两时间点DM组与DM+SF组相比体重差异无统计学意义(P0.05)。2生化指标:各时间点血肌酐、尿素氮、血糖、24h尿蛋白定量DM组及DM+SF组较NC组明显升高,差异有统计学意义(P0.05);DM组及DM+SF组血糖值无明显差异(P0.05);与DM组相比SF+DM组血肌酐、尿素氮、24h尿蛋白定量降低,差异具有统计学意义(P0.05)。3 MDA、T-AOC水平:DM组及DM+SF组肾皮质匀浆中MDA浓度高于NC组(P0.05),T-AOC活性小于NC组(P0.05);与DM组比较,两个时间点,DM+SF组肾皮质匀浆MDA浓度降低(P0.05),T-AOC活性增高(P0.05)。4肾脏组织HE及PAS染色:NC组大鼠肾小球结构正常,肾小管上皮细胞排列整齐,结构清晰,基底膜染色粗细均匀一致,无系膜细胞及系膜基质增多等异常改变;DM组部分肾小球体积增大,系膜细胞及基质增多,系膜区增宽,基底膜粗细不均,部分部位出现肾小管扩张,部分肾小管上皮细胞出现空泡变性,12周末上述病理改变最为突出,DM+SF组与DM组比较上述病理变化相对减轻。5免疫组织化学染色:Nrf-2、HO-1、VEGF在NC组肾脏组织少量表达;两时间点,DM组Nrf-2、HO-1、VEGF表达量较NC组相对增加;DM+SF组较DM组Nrf-2、HO-1表达增多,VEGF表达减少,差异有统计学意义(P0.05)。6荧光定量PCR:与NC组相比两时间点DM组中Nrf2、HO-1、VEGFm RNA相对表达量增加,差异有统计学意义(P0.05);DM+SF组较DM组Nrf2、HO-1m RNA表达量增加,VEGFm RNA表达量减少,差异有统计学意义(P0.05)。结论:1糖尿病状态下,大鼠肾脏存在氧化应激,在氧化应激状态下Nrf2/ARE通路调控的抗氧化蛋白表达增多。2莱菔硫烷可以降低肾组织MDA含量,增加T-AOC的活力,诱导Nrf2及其下游的抗氧化蛋白HO-1的表达,改善糖尿病大鼠肾脏的氧化应激状态;也可通过抑制VEGF的表达来改善糖尿病时肾脏内皮细胞功能障碍。3莱菔硫烷对糖尿病大鼠肾脏具有保护作用,其机制可能是通过改善肾脏氧化应激及内皮细胞功能障碍实现的。

【关键词】：
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R587.2
【目录】：

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1 冯敏;徐成波;温俊平;林桂芳;吕琦;黄国良;;糖基化终产物对人肾小球系膜细胞氧化应激及MCP-1表达的影响及机制[J];中国应用生理学杂志;2014年04期

2 邵侃;黄珊;卢苏梅;汤瑜斌;衡晓湘;裘佳颖;夏莉莉;;人体生物刺激反馈仪对2型糖尿病患者心血管自主神经病变的筛查及相关危险因素分析[J];中国全科医学;2013年23期

3 冯晓红;杨雪辉;吴巧敏;魏佳平;;高尿酸血症对早期2型糖尿病肾病的影响[J];中国中西医结合肾病杂志;2010年08期

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1 韩孟;;针灸联合硫辛酸治疗糖尿病心血管自主神经病变临床观察[J];中医临床研究;2016年21期

2 靳建忠;张荣;赵丽芝;;阿魏酸钠治疗糖尿病自主神经病变的临床效果观察[J];医学理论与实践;2016年06期

3 李业琼;;AGEs介导的糖尿病肾损伤机制及二甲双胍的干预作用[J];临床与病理杂志;2016年03期

4 樊文萍;商静;杨彦娟;侯明辉;王建国;;2型糖尿病高血尿酸患者肾小球损伤及心脑血管事件发生情况分析[J];山东医药;2015年47期

5 路万虹;张晓田;成少利;施秉银;;复方丹参滴丸对大鼠糖尿病肾病早期的肾脏保护及作用机制[J];西安交通大学学报(医学版);2016年01期

6 董春芳;李丽;;高尿酸血症对2型糖尿病早期患者肾脏的危害性[J];国际检验医学杂志;2015年22期

7 任兴芬;刘家生;;基于氧化应激探讨益气活血通络法防治糖尿病肾病[J];中医药临床杂志;2015年09期

8 王欣;;趋化因子与糖尿病肾病关系的研究进展[J];内蒙古医学杂志;2015年08期

9 陈予;林夏舫;陈景;;2型糖尿病肾病患者血尿酸水平与胰岛素抵抗和肾脏损害的相关性分析[J];牡丹江医学院学报;2015年04期

10 戴彧君;翁敏;;2型糖尿病肾病相关危险因素分析[J];现代医药卫生;2015年11期

【二级参考文献】

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1 张利华;张薇;韦广洪;杨沛;刘军;牛晓琳;;α-亚麻酸对糖尿病大鼠炎症介质和氧化应激的影响[J];中国应用生理学杂志;2012年01期

2 钟林娜;黄国良;冯敏;张莹;;缬沙坦对人肾小球系膜细胞糖基化终产物受体表达的影响[J];中国应用生理学杂志;2011年03期

3 王俊杰;朱苏红;刘梅芳;刘文彦;;尿酸与心肾疾病危险[J];四川生理科学杂志;2009年03期

4 张庆燕;刘志红;;高尿酸血症与肾脏损伤[J];肾脏病与透析肾移植杂志;2009年03期

5 陈惠萍;刘志红;;提高高尿酸血症肾脏损害的认识[J];肾脏病与透析肾移植杂志;2009年03期

6 蒋升;李素华;;老年高尿酸血症与糖尿病前期及胰岛素抵抗的关系[J];中国全科医学;2009年01期

7 李香玲;郭振涛;刘晓霞;张喜燕;肖青;谢海;;~(99)Tc~m-DTPA肾动态显像与β_2-MG及mAlb联合检测对糖尿病患者早期肾功能损害诊断价值的探讨[J];中国中西医结合肾病杂志;2008年12期

8 任昊;刘宏发;刘郑荣;;高尿酸血症和肾脏[J];现代中西医结合杂志;2008年01期

9 张改华;饶向荣;;尿酸在慢性肾脏疾病进展中的可能作用[J];中国中西医结合肾病杂志;2007年07期

10 宁光;;糖尿病周围神经病变诊断研究进展[J];中国实用内科杂志;2007年07期

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3 李斓;喻姗姗;李玲玉;吴晓颖;陈宴林;赵敬;;莱菔硫烷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究[J];中风与神经疾病杂志;2012年04期

4 林娜;单毓娟;赵瑞芳;袁超;王舒然;;莱菔硫烷对血管内皮细胞粘附分子表达影响[J];中国公共卫生;2009年03期

5 张国良;赵秀娟;张宇秋;赵艳;张海金;吴坤;;蔬菜中莱菔硫烷提取工艺的正交优选[J];哈尔滨医科大学学报;2009年06期

6 胡丽贞;李雅杰;薛宏凤;王舒然;;莱菔硫烷对高脂环境下心肌细胞保护作用[J];中国公共卫生;2013年10期

7 胡晔;梁浩;袁其朋;;十字花科植物种子中莱菔硫烷的薄层色谱鉴别[J];北京化工大学学报(自然科学版);2006年02期

8 王丽红;刘娟;王桂艳;杜娟;;光果葶苈中莱菔硫烷的提取及含量测定[J];中国现代应用药学;2010年04期

9 张小林;翁惠萍;张海燕;;萝卜硫烷的研究进展[J];化工中间体;2008年12期

10 张小林;;萝卜硫烷的研究进展[J];化工中间体;2010年03期

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1 张国良;赵秀娟;张宇秋;吴坤;;蔬菜中莱菔硫烷的提取与纯化技术[A];第四届第二次中国毒理学会食品毒理学专业委员会与营养食品所毒理室联合召开学术会议论文集[C];2008年

2 王敏;李延青;陈建;高艳景;于涛;杨晓云;袁孟彪;;莱菔硫烷诱导鼠结肠代谢酶活性及生物学效应的实验研究[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编（下册）[C];2007年

3 潘萌;黄睿;何灿霞;赵越;单毓娟;;莱菔硫烷通过p38-NF-κB通路抑制环氧化酶-2的表达[A];中国毒理学会第三届中青年学者科技论坛暨2011年全国前列腺药理毒理学研讨会论文集[C];2011年

4 杨方星;庄树林;张超;戴和平;刘维屏;;莱菔硫烷对二噁英毒性的保护作用[A];第七次全国分析毒理学大会暨第四届分析毒理专业委员会第二次会议论文摘要集[C];2012年

中国重要报纸全文数据库 前1条

1 刘霞;[N];科技日报;2011年

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 梁浩;莱菔硫烷的制备及其抗癌活性的研究[D];北京化工大学;2007年

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1 李琳;Nrf2、HO-1、VEGF在糖尿病大鼠肾脏中表达情况及莱菔硫烷对其干预作用的研究[D];河北医科大学;2015年

2 杨述亮;PI3K/Akt/GSK-3β通路在莱菔硫烷调控心肌冷缺血再灌注损伤中的作用[D];华北理工大学;2015年

3 肖倩;莱菔硫烷的稳定性及胃漂浮片的研究[D];北京化工大学;2007年

4 李扬;西兰花芽苗菜中莱菔硫烷的分离纯化及抗癌活性的测定[D];黑龙江八一农垦大学;2009年

5 王慧;莱菔硫烷载药体系的制备与评价[D];北京化工大学;2011年

6 付建飞;莱菔硫烷对高脂膳食小鼠糖代谢的调控作用及机制研究[D];宁波大学;2014年

7 李椿方;大孔吸附树脂和逆流色谱分离纯化莱菔硫烷的研究[D];北京化工大学;2008年

8 闫旭;高纯度莱菔硫烷的制备及其工业化放大研究[D];北京化工大学;2011年

9 张胜智;西兰花种子中硫代葡萄糖苷的提取及高纯度莱菔硫烷的制备工艺研究[D];北京化工大学;2012年

10 李斓;莱菔硫烷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究[D];重庆医科大学;2012年

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