一种从外周血单个核细胞中祛除低密度粒细胞并纯化T淋巴细胞的简易方法（英文）

发布时间：2018-04-22 19:08

  本文选题：低密度粒细胞 + 中性粒细胞胞外网状陷阱　； 参考：《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》2017年07期

【摘要】：目的:系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中的低密度粒细胞(LDGs)可以自发而过度地形成中性粒细胞胞外网状陷阱(NETs),而形成的NETs会降低T细胞激活的阈值。采用PBMCs做淋巴细胞研究时,所含的异常增多的LDGs可能会显著影响实验结果。因此需要了解其他自身免疫病中LDGs的比例,并需要一种简便地祛除PBMCs中LDGs的方法。创新点:首次提出LDGs清除的方法,验证了离心后贴壁法清除LDGs的有效性和可靠性。方法:采用流式细胞仪测定55例皮肌炎(DM)患者、15例多发性肌炎(PM)患者、42例类风湿关节炎(RA)患者、25例SLE患者(阳性对照)和19例健康对照(阴性对照)PBMCs中LDGs的比例。采用提高离心力、离心后贴壁和全血沉淀后再离心这三种方法祛除PBMCs中的LDGs,进一步比较各种方法的LDGs清除率和对PBMCs中T细胞的影响程度。清除T-SPOT.TB阳性患者PBMCs中LDGs后复测T-SPOT.TB,明确LDGs是否对T-SPOT.TB结果有影响。结论:本研究中DM、PM、RA和SLE患者PBMCs中LDGs比例普遍升高(图1)。清除PBMCs中LDGs后,T-SPOT.TB显著降低(图2)。离心后贴壁法不但能最有效地清除LDGs,且对PBMCs中T细胞的比例影响最小(图3~5)。综上所述,PBMCs中LDGs的比例在DM、PM、RA和SLE患者中普遍增高;采用PBMCs做T细胞相关研究时LDGs通过形成NETs对T细胞激活的影响不能忽视;离心后贴壁法可以简单而高效地清除PBMCs中的LDGs。
[Abstract]:Aim: low density granulocyte (LDGs) in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from patients with systemic lupus erythematosus (SLE) can spontaneously and excessively form neutrophil net traps, and the resulting NETs can decrease the threshold of T cell activation. When PBMCs is used for lymphocyte study, the abnormal increase of LDGs may significantly affect the results of the experiment. Therefore, we need to understand the proportion of LDGs in other autoimmune diseases, and a simple method to remove LDGs from PBMCs. Innovation: the method of LDGs removal is put forward for the first time, which verifies the effectiveness and reliability of centrifugal adherent method for LDGs removal. Methods: flow cytometry was used to determine the proportion of LDGs in 55 patients with dermatomyositis, 15 patients with polymyositis and 42 patients with rheumatoid arthritis (RA) and 25 patients with SLE (positive control) and 19 healthy controls (negative control). The LDGs in PBMCs were removed by three methods: increasing centrifugal force, sticking to the wall after centrifugation and centrifugation after whole blood precipitation. The LDGs clearance rate and the degree of influence on T cells in PBMCs were compared. After removing LDGs from PBMCs of T-SPOT.TB positive patients, T-SPO T. TB was measured again to determine whether LDGs had an effect on the results of T-SPOT.TB. Conclusion: in this study, the proportion of LDGs in PBMCs was significantly increased in patients with SLE and RA (Fig. 1). T-SPOT.TB was significantly decreased after LDGs removal in PBMCs (Fig. 2). After centrifugation, adherent method not only effectively scavenged LDGs, but also had the least effect on the proportion of T cells in PBMCs (Fig. 3). In conclusion, the proportion of LDGs in PBMCs was generally increased in patients with RA and SLE, the effect of LDGs on the activation of T cells by forming NETs could not be ignored when PBMCs was used for T cell related studies, and the adherent method after centrifugation could easily and efficiently remove LDGs from PBMCs.
【作者单位】： Department
【基金】：Project supported by the National Natural Science Foundation of China(Nos.81560267 and 81401363) the Natural Science Foundation of Gansu Province(No.1606RJZA213) the Asia Pacific League of Associations for Rheumatology(APLAR) Research Grant 2015
【分类号】：R593.241

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