Apelin-13逆转醛固酮对血管内皮细胞损伤的作用及其机制

发布时间：2018-05-31 00:30

本文选题：原发性醛固酮增多症 + 血管内皮细胞　；参考：《浙江大学》2015年硕士论文

【摘要】：背景与目的：原发性醛固酮增多症(简称原醛症)是肾上腺皮质病变引起醛固酮分泌增多,导致潴钠排钾、体液容量增加,从而抑制肾素-血管紧张素系统的一种疾病,主要表现为低肾素、高血压伴(或不伴)低血钾、碱中毒、夜尿增加。原醛症患者多有中重度难以控制的高血压,同时其心血管及代谢性并发症较原发性高血压具有更高的危险性。Apelin是新近发现的一类小分子生物活性肽,是血管紧张素受体相关蛋白(angiotensin receptor-like protein J, APJ)的天然配体,其在体内具有多种亚型,其中Apelin-13作为亚型之一,具有较强的生物活性。Apelin已被证明具有舒张血管降低血压,增强心肌收缩力,调节体液稳态,调节胰岛素分泌,促进细胞的增殖、迁移、血管形成等作用,从而使Apelin/APJ系统有望成为原醛症合并心血管及代谢性并发症的治疗新靶点。本研究主要通过体外观察Apelin-13逆转醛固酮对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)细胞功能的损伤及其相关机制。其中第一部分通过体外实验观察Apelin-13逆转醛固酮对HUVECs增殖及血管成形功能的影响,同时筛选出Apelin-13逆转醛固酮对HUVECs细胞功能损伤时表达水平显著变化的：mRNA;第二部分观察Apelin-13逆转醛固酮促进HUVECs衰老的作用并探讨血管内皮细胞衰老相关蛋白在该逆转过程中表达量的变化及其信号通路,从而为原醛症并发症的预防及治疗提供新的思路。方法：第一部分：用含10%胎牛血清的1640培养基进行体外培养人脐静脉内皮细胞,取第10～15代细胞用于实验。醛固酮作用HUVECs24小时后,加或不加Apelin-13继续干预24小时,用MTS试验检测HUVECs的增殖、Matrigel基质胶检测HUVECs的血管形成状况。通过文献检索,选取12种内皮细胞血管成形功能相关mRNA (Angiopoietin-1, Angiopoietin-2, VEGFA, VEGFR-1, VEGFR-2, Tie-2, EGF, FGF-2, eNOS, HO-1, HIF-1α,Sirt-3), qRT-PCR法筛选Apelin-13逆转醛固酮损伤作用时表达水平显著变化的mRNA.同时利用APJ siRNA转染HUVECs从而下调其细胞内Apelin受体水平,采用MTS试验,Matrigel基质胶检测HUVECs的增殖和血管成形能力。第二部分：体外培养HUVECs,药物干预处理及APJ siRNA转染HUVECs均同第一部分,采用β-半乳糖苷酶染色鉴定衰老细胞。进一步采用Western-Blot检测内皮细胞衰老功能相关的蛋白(Sirt-1, eNOS),观察Apelin-13逆转醛固酮诱导HUVECs细胞衰老时上述蛋白的表达水平。结果：第一部分：10nmol/L醛固酮干预后HUVECs的增殖、血管形成受到抑制,而醛固酮作用24小时后再加入lumol/1Apelin-13继续干预24小时后,HUVECs的增殖、血管成形较醛固酮单独作用组明显改善。qRT-PCR法检测显示Apelin-13显著逆转了醛固酮单独作用时所引起的Ang-1, Ang-2, VEGFR-1、VEGFR-2及Tie-2表达水平降低的状态。进一步使用APJ siRNA下调Apelin受体的表达可消除Apelin-13逆转醛固酮对HUVECs增殖和血管形成的抑制作用。第二部分：同第一部分药物干预后,Apelin-13逆转了醛固酮诱导的HUVECs细胞衰老功能。Western-Blot检测发现,Apelin-13逆转了醛固酮对HUVECs细胞衰老相关蛋白Sirt-1, eNOS的下调作用。结论：第一部分：醛固酮可抑制HUVECs增殖和血管形成能力,而Apelin-13可逆转其对HUVECs增殖和血管成形功能的损伤作用。其中Ang-1、Ang-2、 VEGFR-1、 VEGFR-2、Tie-2在Apelin-13逆转醛固酮增殖和血管成形功能损伤作用中表达水平升高,可能在介导Apelin-13逆转醛固酮对内皮细胞血管形成损伤过程中发挥重要作用。第二部分：醛固酮可促进HUVECs细胞的衰老,同样Apelin-13可逆转其对HUVECs衰老程度的影响。进一步研究发现在蛋白水平上,Sirt-1/eNOS信号通路在Apelin-13逆转醛固酮促衰老作用中具有重要影响。
[Abstract]:Background and Purpose :

Apelin / APJ has been proved to be a kind of new target . Apelin / APJ can be used as one of the subtypes of angiotensin receptor - like protein J ( APJ ) .

Method :

Human umbilical vein endothelial cells were cultured in vitro by using 1640 medium containing 10 % fetal bovine serum . After 24 hours of treatment with aldosterone , the expression level of Apelin - 1 , Angiopoietin - 2 , VEGFA , VEGFR - 1 , VEGFR - 2 , Tie - 2 , EGF , FGF - 2 , eNOS , HO - 1 , HIF - 1伪 , S.

Results :

The results showed that the expression of Ang - 1 , Ang - 2 , VEGFR - 1 , VEGFR - 2 and Tie - 2 were significantly reduced after 24 hours of aldosterone , and the expression level of Ang - 1 , Ang - 2 , VEGFR - 1 , VEGFR - 2 and Tie - 2 was significantly reduced .

The second part : Apelin - 13 reversed aldosterone - induced senescence - induced apoptosis after drug intervention with the first part . Western - Blot showed that Apelin - 13 reversed the downregulation effect of aldosterone on the senescence - related protein SSIONS - 1 and eNOS .

Conclusion :

The first part : Aldosterone can inhibit the proliferation and the formation of vascular endothelial cells , and Apelin - 13 can reverse its effects on proliferation and vascular forming . The expression level of Ang - 1 , Ang - 2 , VEGFR - 1 , VEGFR - 2 , Tie - 2 in Apelin - 13 reversed aldosterone proliferation and vascular forming function injury may play an important role in mediating the injury of endothelial cells .

The second part : Aldosterone can promote the aging of the cells , and Apelin - 13 can reverse its effect on the degree of aging . Furthermore , it is found that the signaling pathway of Scloser - 1 / eNOS plays an important role in the reversal of aldosterone - induced senescence in Apelin - 13 .
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R586.24

【参考文献】