PRDM1在桥本甲状腺炎和甲状腺乳头状癌发生中的分子机理研究

发布时间：2018-06-02 07:21

本文选题：桥本甲状腺炎 + 甲状腺乳头状癌　；参考：《第四军医大学》2015年博士论文

【摘要】：桥本甲状腺炎(Hashimoto’s thyroiditis,HT),因日本学者桥本策于1912年首先报道而命名,是最常见的器官特异性自身免疫性疾病。该病不仅会引起永久性甲状腺功能低下,还与甲状腺癌和淋巴瘤发生密切相关,尤其是甲状腺乳头状癌(Papillary thyroid carcinoma,PTC)。HT的核心病理学特征是显著的淋巴细胞及大量浆细胞浸润和淋巴滤泡形成、甲状腺滤泡上皮细胞变性和破坏,直至晚期形成纤维化。虽然已经历逾百年的研究,其病因仍不明确。目前研究表明,HT的发病是环境因素和遗传因素共同作用的结果。而在环境因素中,病毒感染可能起重要作用,但其病因和发病机制仍未阐明。人类微小病毒B19(Parvovirus B19,PVB19)是单链DNA病毒,属于微小病毒科,仅对人类致病。PVB19感染普遍存在,并与多种自身免疫性疾病的发生密切相关,但既往研究未涉及HT与PTC。我们课题组一直致力于PVB19在疾病发生发展中的作用研究,发现PVB19在HT的发病及HT向PTC恶性转化中发挥作用。正性调控域锌指蛋白1(Positive regulatory domain zinc finger protein 1,PRDM1)是一种具有锌指结构域的抑制性蛋白,其主要功能包括早期胚胎发育和浆细胞分化。PRDM1也表达于T细胞、巨噬细胞等淋巴滤泡的主要细胞成分,提示其在淋巴滤泡形成和机体免疫调节中发挥重要作用。综上所述,我们自然会问,ht的病变组织中是否存在prdm1表达?其定位如何?另外,鉴于ht-ptc存在恶性转化,那么,prdm1在此过程中是否也起作用?其分子机理为何?同时,由于pvb19与ht及ptc的发病关系密切,那么,pvb19感染与prdm1表达是否有关?对这些问题的回答不仅对阐明ht的发病和转化机制有重要的意义,而且也可以为ht及ptc的防治提供新的理论依据。本研究首先用含有16种人类肿瘤及瘤旁组织(包括食道、胃、结肠、直肠、肝、肺、肾、乳腺、宫颈、卵巢、膀胱、淋巴结、皮肤、脑、前列腺和胰腺)组织芯片以及甲状腺癌及癌旁组织芯片筛查prdm1的表达,以明确其组织特异性及其蛋白表达谱;通过回顾性研究prdm1蛋白在正常甲状腺(30例)、结节性甲状腺肿(20例)、ht(86例)、甲状腺腺瘤(42例)、ptc(54例)、甲状腺滤泡癌(6例)和甲状腺髓样癌(9例)手术标本的表达,明确其在正常甲状腺及多种甲状腺疾病组织的表达模式,并对其阳性率和阳性等级进行评价,探讨该分子在甲状腺疾病发生中的作用;通过配对比较4例ht和4例ptc新鲜组织中prdm1和pvb19基因及蛋白表达情况,对两种蛋白的相互关系进行初步分析;通过在原代培养人甲状腺滤泡上皮细胞中转染prdm1和pvb19基因,检测基因变化,探讨prdm1在ht发生中的潜在作用机制;通过沉默人甲状腺乳头状癌细胞系sw579中的prdm1基因,初步探讨其在ptc中的生物学功能。本研究的主要结果与发现如下:1.在人体16种肿瘤及瘤旁组织芯片检测中,prdm1呈散在表达;而在甲状腺癌及癌旁组织芯片中(ptc23例、ftc16例和正常组织8例),发现22例ptc和9例ftc癌细胞胞浆表达阳性,正常组织全部阴性。同时,根据芯片提供的临床分期资料将甲状腺癌的tnm分期与prdm1表达程度进行spearman相关分析。结果显示,prdm1表达阳性程度与直接浸润能力t(p=0.464)和淋巴结转移n(p=0.064)并无相关性。扩大甲状腺疾病病变类型和病例数后进行了手术标本的大样本分析,发现在ht、甲状腺腺瘤、ptc、甲状腺滤泡癌和髓样癌组织中prdm1阳性率分别为96.5%、35.7%、79.6%、83.3%、77.8%,而在正常甲状腺和结节性甲状腺肿中表达均阴性。综合统计分析显示prdm1在ht(p=0.000)和ptc(p=0.002)的表达阳性率与其它类型组织具有显著性差异;2.对81例ht和54例ptcprdm1表达和pvb19蛋白切片进行数字化测量和配对分析,发现两种疾病中prdm1和pvb19表达显著相关(htp=0.000,ptcP=0.002);在对4例HT和4例PTC新鲜组织基因和蛋白表达进行检测,在2例HT和1例PTC中PRDM1和PVB19共存,进一步使用免疫荧光共聚焦技术分析,发现两种蛋白具有共定位,免疫沉淀也证实二者具有相互作用;3.原代培养人甲状腺滤泡上皮细胞中分别瞬时转染PRDM1和PVB19基因后进行NFκB mRNA检测,发现与转入PVB19 VP1相比,转入PVB19 NS1基因后PRDM1和NFκB表达均显著上调(PRDM1 P=0.017;NFκB P=0.040)。PRDM1和NFκB表达峰值分别出现于转染后36 h和24 h,提示NFκB在PVB19 NS1介导PRDM1表达中起重要作用。4.检测PRDM1 RNA干涉前后甲状腺乳头状癌细胞系SW579的状态和周期,发现处理后细胞凋亡现象明显增加;处理前细胞周期G1、G2和S期比例分别为53.9%、36.4%和9.71%,处理后分别变为69.5%、6.92%和23.6%,G1期(P=0.030)、G2期(P=0.000)和S期(P=0.006)细胞比例变化有显著性差异。综合以上结果,可以得出以下结论:PRDM1在人体多数组织中都有表达,但表达方式有所不同;PRDM1在甲状腺疾病特别是HT和PTC发病中有重要作用,并与PVB19感染密切相关,其表达很可能是PVB19感染诱导所致,并且NFκB参与该过程;PRDM1在甲状腺癌总体表达程度与浸润和转移能力无关,但其表达强度与增殖能力有关,并在PTC细胞周期调控和抗凋亡方面有重要作用。
[Abstract]:Hashimoto ' s thyroid carcinoma ( HT ) , named after first reported in 1912 , is the most common type of organ - specific autoimmune disease . The disease not only causes permanent hypothyroidism but also closely related to thyroid cancer and lymphoma , especially papillary thyroid carcinoma ( PTC ) . In this study , it is suggested that the pathogenesis and pathogenesis of HT may play an important role in the development of lymphoid follicles . The expression of prdm1 and pvb19 genes in thyroid carcinoma and adjacent tissues were analyzed . The results showed that the positive rates of prdm1 and pvb19 in thyroid adenoma , thyroid adenoma , thyroid follicular carcinoma ( 6 cases ) and medullary thyroid carcinoma ( n = 0.064 ) were analyzed . The results showed that the positive rates of prdm1 and pvb19 in thyroid carcinoma and adjacent tissues were 96.5 % , 33.7 % , 79.6 % , 83.3 % and 77.8 % respectively . The results showed that the expression of PRDM1 and NF - 魏B in human thyroid follicular epithelial cells increased significantly ( PRDM1 P = 0 . 017 ; NF - 魏B P = 0 . 040 ) . Conclusion : PRDM1 plays an important role in the pathogenesis of thyroid diseases , especially in HT and PTC .
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R736.1;R581.4

【参考文献】