L1前脂肪细胞分化的影响及其调控机制研究

发布时间：2016-12-16 12:05

  本文关键词：GLP-1对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响及其调控机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

《山东大学》 2013年

GLP-1对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响及其调控机制研究

杨俊朋  

【摘要】：研究背景： 目前,肥胖及2型糖尿病已经成为我国面临的严重公共卫生问题。作为代谢异常性疾病二者存在相近的发病基础,脂质异常沉积与胰岛素抵抗是其共同土壤[1]。尽管多种遗传因素引起肥胖及胰岛素抵抗,但环境因素中最主要的是长期能量摄入超过消耗,导致体内脂肪过多蓄积,引起肥胖及脂质代谢紊乱。肥胖在细胞层面上主要表现为已存在的脂肪细胞体积的肥大和由前脂肪细胞分化而来的脂肪细胞数量的增多。研究表明,脂肪细胞体积的肥大以及由前脂肪细胞分化而来的脂肪细胞数量的增多在成人肥胖的发生发展过程中均发挥着重要作用。然而,这两种变化对脂质及糖代谢的作用有着显著的差别。脂肪细胞体积的肥大与脂质代谢紊乱及胰岛素抵抗密切相关；而脂肪细胞数量的增多(小体积脂肪细胞)则有助于改善高脂血症,增加胰岛素敏感性。胰高糖素肽-1(glucagon-like peptide-1, GLP-1)是由肠L细胞产生的目前己知作用最强的肠促胰岛素分泌肽,除了调控血糖之外,还具有调节食欲、血压、血脂,改善心功能、保护血管内皮功能等多重生物学功能。研究证明,GLP-1能够上调脂肪细胞表面胰岛素受体(IR-β)及胞内胰岛素底物(IRS-1)的数量,促进葡萄糖转运子4(GLUT-4)的表达,抑制脂肪细胞中炎症通路激活等改善脂肪细胞体积的肥大,进而改善胰岛素抵抗；然而,GLP-1对前脂肪细胞的分化的影响尚有争议,其能否促进小体积脂肪细胞的形成尚缺乏足够研究。本实验以3T3-L1前脂肪细胞为实验对象,在其分化过程中给予重组人GLP-1进行干预,研究GLP-1对前脂肪细胞分化的影响及其调控机制,以期为肥胖的防治提供新的作用靶点。 研究目的： 1.观察GLP-1对3T3-L1前脂肪细胞分化过程中脂肪标志性蛋白LPL、 aP2及转录因子PPAR-γ、C/EBPa表达的影响。 2.观察GLP-1对3T3-L1前脂肪细胞分化过程中脂质聚集以及脂肪细胞形态的影响。 3.初步探讨GLP-1发挥上述作用的分子机制。 研究方法： 1.3T3-L1前脂肪细胞的培养与分化：在无菌条件下培养3T3-L1前脂肪细胞,采用传统“鸡尾酒”法来诱导前脂肪细胞分化。 2.给予3T3-L1前脂肪细胞不同浓度的GLP-1进行干预,用MTT法检测其对细胞活力的影响,选取合适的浓度范围。 3.RT-PCR及Western-blot检测脂肪细胞脂肪标志性蛋白LPL、aP2及转录因子PPAR-γ、C/EBPa的表达。 4.油红O染色检测3T3-L1前脂肪细胞诱导分化第8天细胞内脂质聚集,用Image Pro plus5.02软件分析脂肪细胞体积和数量的变化。 5. RT-PCR检测诱导分化第8天时解偶联蛋白-1(UCP-1)和肉碱脂酰转移酶-1(CPT-1A)的mRNA表达。 6.Western-blot检测Akt、P38、ERK1/2信号通路的变化。 研究结果： 1.GLP-1显著促进脂肪细胞标志性蛋白LPL、aP2和转录因子PPAR-γ、 C/EBPa的mRNA水平,呈浓度依赖性及时间依赖性(P0.05)。 2.与对照组相比,GLP-1显著促进转录因子PPAR-γ和脂肪细胞标志性蛋白aP2的蛋白表达,呈浓度依赖性及时间依赖性(P0.05)。 3.与对照组相比,GLP-1组且pAkt的蛋白表达水平显著增加(P0.05),而pP38和pERK1/2的蛋白水平未见显著变化。 4.油红O染色结果显示,100nM GLP-1显著增加小体积脂肪细胞的形成(P0.05)。 5.与对照组和其他浓度组相比,100nM GLP-1组脂肪细胞中CPT-1A的mRNA表达水平显著增加(P0.05),而UCP-1的mRNA表达无显著变化。 研究结论： 1.在3T3-L1前脂肪细胞分化过程中,GLP-1呈剂量及时间依赖性的促进PPAR-γ、C/EBPα、LPL和aP2的表达。 2.Akt信号通路可能参与GLP-1的上述作用过程。 3.100nM GLP-1能促进更多小体积脂肪细胞的形成,该细胞中CPT-1A的mRNA表达显著增加。

【关键词】：
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R589.2
【目录】：

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