晚期氧化蛋白产物诱导成骨细胞凋亡的机制研究

发布时间：2024-07-06 12:06

　　研究背景骨质疏松症是一种以骨量降低,骨组织微结构退化为主要表现的慢性退行性疾病。骨质疏松症的发生率随着年龄的增长而显著增加。老年性骨质疏松主要的特征之一是成骨细胞数量减少,活性降低所导致的骨形成减少。细胞凋亡是调节成骨细胞稳态的主要机制。随着年龄增长,成骨细胞凋亡显著增加,最终可以导致骨量丢失。氧化应激在机体衰老过程中普遍存在,晚期氧化蛋白产物(AOPPs,advanced oxidation protein products)是一类含有二酪氨酸的新型氧化应激标志物。AOPPs可以诱导产生大量活性氧(ROS,reactive oxygen species),并导致多种细胞凋亡。因此,AOPPs不仅是氧化应激的产物,其本身也是一种新型的致病物质。前期研究表明,AOPPs水平随着年龄增长显著增加,并与老年性骨量丢失发生发展呈正相关;AOPPs刺激老年大鼠可以显著加速其骨量丢失,骨质退化。因此我们提出假设:AOPPs通过诱导成骨细胞凋亡参与了年龄相关骨量丢失以及老年性骨质疏松的发生发展。材料与方法本研究的体外实验部分选取小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1细胞为模型,使用AOPPs刺激,观察AO...

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１－１．入０？？８剌激诱导１＼１０１３－￡１细胞调亡

１．３．１?ＡＯＰＰｓ诱导ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞凋亡??为了验证ＡＯＰＰｓ是否可以诱导成骨细胞凋亡，我们选择体外培养的前成骨??细胞系ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞作为模型。如图１－１Ａ所示，ＡｎｎｅｘｉｎＶ－ＦＩＴＣ／ＰＩ双染配合??流式细胞技术结果显示：２４ｈ时，单纯完全培养基组，２０（....

图１－２．?ＡＯＰＰｓ刺激激活ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞内源性凋亡途径

?作为对照。使用ＪＣ－１线粒体膜电位探针，通过检测绿色和红色荧光强度的比值??来反应线粒体膜电位的变化情况。如图１－２Ａ激光共聚焦图片所示，ＡＯＰＰｓ刺激??后，绿色荧光／红色荧光比值显著升高，提示线粒体膜电位的下降，并呈现浓度??依赖性。用２０〇ｎｇ／ｍｌ?ＡＯＰＰｓ刺激ＭＣ３....

图２＿１．?ＡＯＰＰｓ刺激诱导ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞产生大量Ｒ〇Ｓ

（２?）使用含打ＡＯＰＰｓ浓度力２００叫／ｍ丨的完伞培养苺分別刺激ＭＣ３＇ｌ＇３－ｍ细胞??Ｏｍｉｎ，?５ｍｉｎ，３０ｍｉｎ，?６０ｍｉｎ，１２０ｍｉｎ，使用??导ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞产生ＲＯＳ随刺激时间变化的情况。结果如图２－１Ｂ所不，??ＡＯＰＰｓ刺激可以显著诱导ＭＣ３Ｔ３－....

图２－??２Ｃ），最终完成ＮＡＤＰＨ氧化酶的激活

?〇ｉ?〇??ＡＯＰＰｓ?（ｐｇ／ｍｌ）??ＡＯＰＰｓ?ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ?ｔｉｍｅ?（ｍｉｎ）??图２＿１．?ＡＯＰＰｓ刺激诱导ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞产生大量Ｒ〇Ｓ。（Ａ）使用不同浓度ＡＯＰＰｓ?（０．??４０〇ｎｇ／ｍｌ）刺激ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞Ｉ２０ｍｉｎ，?ＤＣＦＨ－Ｄ....

本文编号：4002529