利用FACS定量研究脂肪组织中肥大细胞的数目

发布时间：2018-10-15 11:53

【摘要】：肥胖会导致脂肪组织中各种免疫细胞数量的失衡,肥大细胞(MCs)在肥胖个体的脂肪组织中数量明显增多,而MCs稳定剂木犀草素(LU)可以降低高脂饮食小鼠附睾脂肪组织(EAT)中MCs的数量,并改善肥胖和胰岛素抵抗的发展。此前的研究是利用甲苯胺蓝染色半定量EAT中MCs数量的变化。甲苯胺蓝染色的特异性和统计精密度都存在一定的欠缺,为了更精确地研究在肥胖过程中脂肪组织中MCs数量的变化,文章建立了高精密度的流式细胞荧光分选(fluorescence activated cell sorting,FACS)技术,并研究了低脂、高脂和高脂补充LU组小鼠EAT中MCs变化情况。FACS分析定量结果显示,MCs在高脂饮食诱导下明显升高,而饮食补充LU可以明显降低MCs的数目。另外,EAT中MC蛋白酶的定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)结果也支持了FACS分析的结果。因此,利用FACS分析脂肪组织中MCs数目的精确变化,为进一步研究MCs在肥胖中的作用机制提供技术支持。
[Abstract]:Obesity leads to an imbalance in the number of immune cells in adipose tissue, and mast cell (MCs) increases significantly in adipose tissue of obese individuals. Luteolin (LU), a MCs stabilizer, could decrease the number of MCs in the (EAT) of epididymal adipose tissue of mice with high fat diet, and improve the development of obesity and insulin resistance. Previous studies have used toluidine blue to dye changes in the number of MCs in semi-quantitative EAT. The specificity and statistical precision of toluidine blue staining are deficient. In order to study the change of MCs quantity in adipose tissue more accurately, a high precision flow cytometry (FCM) technique was established for sorting (fluorescence activated cell sorting,FACS. The changes of MCs in EAT of low fat, high fat and high fat supplemented LU mice were studied. The quantitative results of FACS analysis showed that MCs increased significantly under the induction of high fat diet, while dietary LU supplementation significantly decreased the number of MCs. In addition, the results of quantitative polymerase chain reaction (polymerase chain reaction,PCR) of MC protease in EAT also support the results of FACS analysis. Therefore, the accurate change of MCs in adipose tissue is analyzed by FACS, which provides technical support for further study on the mechanism of MCs in obesity.
【作者单位】： 合肥工业大学生物与医学工程学院;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(31171315)
【分类号】：R589.2

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