多种营养素干预燃煤型氟中毒对雌鼠卵巢生殖功能影响

发布时间：2018-10-17 14:16

【摘要】：目的:探讨钙、镁、铜、锌、维生素D和大豆干预燃煤型氟中毒对雌鼠卵巢生殖功能影响及其干预可能机制。方法:1.采用自由食用添加钙、镁、铜、锌、维生素D和大豆不同配方的织金病区原煤加拌泥煤烘烤的玉米饲料构建动物模型;2.动态观察雌鼠染氟期间牙齿的变化情况;3.采用离子选择电极法、高温灰化-氟离子选择电极法测定雌鼠尿氟、骨氟含量;4.分离卵巢:①称重,计算卵巢的脏器系数。②电镜下观察卵泡组织超微结构及颗粒细胞凋亡情况。③用免疫组化法观察卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。④HE染色光镜下观察卵巢组织形态、各级卵泡及黄体的数量变化。5.于不同时间段(60d、120d、180d)的动情期处死雌鼠,采用股动脉取血法收集雌鼠血液,分离血清,采用放射免疫法检测血清中雌二醇(E2)含量;结果:1.成功复制染氟组和干预组动物模型;2.随着染氟时间的延长,雌鼠氟斑牙症状逐渐加重,干预组出现轻度氟斑牙,且多种元素+大豆干预组氟斑牙的发生较多种元素干预组轻;3.染氟时间相同的组别(60、120、180d):染氟组雌鼠尿氟、骨氟含量均高于对照组,有统计学意义(P0.05),且染氟组、两干预组雌鼠的尿氟逐渐增加,且后者明显高于前者,均有统计学意义(P0.05);与染氟组比较,两干预组雌鼠的骨氟逐渐降低,有统计学意义(P0.05);各组内比较:随着时间的延长,尿氟含量均逐渐增加,各组尿氟含量间均有统计学意义(P0.05)。染氟组骨氟含量逐渐增加均有统计学意义(P0.05);两干预组骨氟含量均逐渐降低,多种元素干预组仅60d、120d骨氟含量与180d有统计学意义(P0.05),多种元素+大豆干预组骨氟含量均有统计学意义(P0.05);4.染氟组卵泡组织超微结构出现颗粒细胞、基质细胞凋亡;两干预组在早期仍可见较明显的超微结构损害,随干预时间延长,与染氟组比较,两干预组雌鼠卵巢颗粒细胞和基质细胞超微结构均基本正常,未见凋亡样改变。添加蛋白质干预表现为卵巢超微结构脂滴明显少于多种元素干预组。5.卵巢颗粒细胞Bax蛋白表达量,染氟120d、180d染氟组明显高于对照组、两干预组,均有统计学意义(P0.05);多种元素+大豆干预组低于多种元素干预组,且180d两干预组间比较差异有统计学意义(P0.05)。相同组别随时间延长:卵巢颗粒细胞Bax蛋白表达量,染氟组、两干预组均逐渐增多,染氟组内比较均有统计学意义(P0.05)。多种元素干预组60d与180d有统计学意义(P0.05)。6.染氟组随时间延长,卵巢颗粒细胞从轻度、中度、到重度呈现渐进性水肿的变化,细胞结构和细胞轮廓变得模糊,闭锁的卵泡和黄体退化逐渐增多,成熟卵泡偶见。两干预组卵巢颗粒细胞少见轻度水肿,细胞结构和细胞轮廓趋于正常,正常的各级卵泡多见,闭锁的卵泡和退化的黄体明显低于染氟组;雌鼠闭锁卵泡数量与染氟组相比,60d对照组、多种元素+大豆干预组有统计学意义(P0.05);120、180d对照组、两干预组均有统计学意义(P0.05)。7.染氟时间相同的组别(60、120、180d)雌鼠E2含量与对照组相比,60d各组逐渐增加有统计学意义(P0.05),多种元素+大豆干预组高于各组有统计学意义(P0.05)。120d、180d,染氟组均低于各组,与对照组、多种元素+大豆干预组比较,有统计学意义(P0.05),且180d两干预组间比较有统计学意义(P0.05)。相同组别随时间延长,对照组雌鼠E2含量呈波动性变化,120d高于60d和180d,且与60d有统计学意义(P0.05)。染氟组E2的含量逐渐降低,且各组之间均有统计学意义(P0.05)。多种元素干预组E2的含量逐渐降低,60d、120d与180d比较有统计学意义(P0.05)。多种元素+大豆干预组E2的含量逐渐降低,60d与180d比较有统计学意义(P0.05)。结论:1.钙、镁、铜、锌、维生素D可拮抗燃煤型氟中毒对卵巢生殖毒性;可拮抗高氟对血清雌激素E2的毒性作用,使卵巢分泌E2趋于正常水平;可拮抗氟中毒对卵泡生长发育的影响,使闭锁卵泡数量降低;可拮抗对雌鼠卵巢组织超微结构的损伤,使卵巢颗粒细胞、基质细胞核、线粒体等超微结构趋于正常水平;可拮抗燃煤型氟中毒对卵巢颗粒细胞Bax促凋亡蛋白表达的影响,下调Bax的表达量,降低卵巢颗粒细胞凋亡。2.在钙、镁、铜、锌、维生素D的基础上添加蛋白质可部分增强对氟中毒的干预,仅表现卵巢超微结构脂滴明显减少、凋亡蛋白Bax表达和闭锁卵泡数量明显降低,且随干预时间延长,效果更佳。3.多种元素+大豆干预和多种元素干预作用对雌鼠的卵巢脏器系数,原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡及黄体数量,卵泡组织形态,凋亡蛋白Bcl-2没有明显影响。
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【学位授予单位】：贵阳医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R599.1

【参考文献】

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本文编号：2276943