甘草酸二铵对百草枯诱导肺泡上皮细胞GR及TLR4的影响

发布时间：2018-12-14 23:45

【摘要】：目的:百草枯(PQ)中毒是临床上常见的急危重症,致死率高,并且目前尚无特效拮抗剂。肺是PQ主要损伤的靶器官,尤其肺泡上皮细胞是其特异性靶点。课题组前期的体内实验发现,甘草酸二铵(DG)可促进急性肺损伤大鼠中糖皮质激素受体(GR)的表达,并且可抑制PQ中毒大鼠中TLR4-MyD88-NF-κB通路的过度表达,进而改善大鼠预后。本实验以PQ诱导肺泡上皮Ⅱ型细胞(AECⅡ)建立体外模型,旨在研究GR、高迁移率族蛋白1(HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子κB p65(NF-κB p65)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、生长转化因子β1(TGF-β1)相关信号分子在PQ中毒条件下的表达变化及DG预治疗对这些信号通路分子的影响及作用机制。方法:大鼠肺泡上皮Ⅱ型细胞分为6组:空白对照组(NS组)、PQ中毒组(PQ组)、DG预治疗组(DG组)、PQ中毒受体阻断组(PR组)、DG预治疗受体阻断组(PDR组)、无水乙醇对照组(NE组)。NS组:不加任何药物干预,培养细胞24h;PQ组:以含1000μmol/L PQ的培养基培养细胞24h;DG组:先以含0.6 mg/mL DG的培养基培养2h,再以含0.6 mg/mL DG+1000μmol/L PQ的培养基培养细胞24h;PR组:先以含100nM RU486的培养基培养2h,再以含100nM RU486+1000μmol/L PQ的培养基培养细胞24h;PDR组:先以含100nM RU486的培养基培养2h,再以含100n M RU486+0.6mg/mLdg的培养基培2h,最后以含100nmru486+0.6mg/mldg+1000μmol/lpq的培养基培养细胞24h;ne组:以含0.33μ/ml无水乙醇的培养基培养细胞24h。以mtt检测不同浓度的pq和dg对肺泡上皮细胞增殖的影响。倒置显微镜下观察每组细胞的形态、生长状况。rt-pcr方法检测gr、hmgb1、tlr4、myd88、nf-кbp65和tgf-β1的基因表达。elisa方法检测gr、hmgb1、tlr4、myd88、nf-кbp65、tgf-β1和tnf-α的蛋白质量浓度。结果:(1)mtt试验中,细胞的存活率随着pq浓度的增加而降低,在浓度为200μmol/l,400μmol/l,600μmol/l,800μmol/l,1000μmol/l和2000μmol/l的pq培养基对应的细胞存活率分别为(88.12±3.15)%,(81.39±3.31)%,(70.90±3.40)%,(59.80±3.15)%,(48.31±3.58)%,(31.56±3.74)%,(16.46±3.16)%,ic50的pq浓度为920.87μmol/l。(2)在dg预治疗的情况下,pq诱导的肺泡上皮细胞的生存率升高,含0mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.6mg/ml、0.8mg/ml、1mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml浓度dg的培养基对应的细胞生存率分别为(47.83±0.54)%,(51.99±1.37)%,(59.32±2.34)%,(66.40±3.26)%,(64.89±3.37)%,(60.78±2.24)%,(55.09±2.42)%,(48.72±0.40)%。(3)倒置显微镜下观察发现,与ns组比较,pq组、pr组、dg组和pdr组中细胞膜出现皱缩,细胞形态不规则,细胞贴壁不良,可见细胞脱落凋亡,甚至出现细胞碎片。而dg组和pdr组中细胞损伤较pq和pr组相比明显减轻。(4)与ns组比较,pq组和dg组中gr的水平明显降低(均,p0.01),但hmgb1、tlr4、myd88、nf-кbp65、tnf-α、tgf-β1的水平均有不同程度的升高(均,p0.01)。并且dg组中gr表达降低的程度小于pq组(p0.01),而dg组中hmgb1、tlr4、myd88、nf-кbp65、tnf-α、tgf-β1表达升高的程度均小于pq组(均,p0.01)。(5)加入阻滞剂RU468后,DG组与PDR组相比,PQ组与PR组相比,NS组和NE组相比,其中HMGB1、TLR4、MyD88、NF-кB p65、TNF-α、TGF-β1的差异无统计学意义(均,P0.05)。结论:甘草酸二铵可升高GR水平,并降低HMGB1、TLR4、MyD88、NF-кB p65、TNF-α、TGF-β1水平,减轻了百草枯诱导的肺泡上皮Ⅱ型细胞的损伤,提高细胞生存率。但甘草酸二铵抗炎机制与激素不同,不受糖皮质激素受体阻断剂影响。
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【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R595.4

【参考文献】