辅酶Q10对高原肺水肿大鼠的保护作用及机制探索

发布时间：2019-01-02 08:56

【摘要】：背景高原肺水肿(HAPE)是一种潜在的致命性疾病,是引起高原病死亡的主要原因,他是非心源性原因引起的迅速的持续的肺水肿,多见于那些对高原环境没有习服或对高原病具有易感性的人群迅速升到2500-3000米以上在2-4天内引起的一种严重疾病。高原肺水肿在2500米的发病率是0.01%,然而在4300米的高度时其发病率增加到(2.5-5)%[1]。如果得不到妥善的救治会很快导致病人的死亡,随着高原地区旅游行业的兴盛以及高原地区自然灾难的频繁发生,进入高原地区的人也越来越多,如何找到一种安全可靠的预防高原肺水肿的药物势在必行。目的本实验通过预防性服用辅酶Q10,观察肺湿干比变化,肺组织匀浆中炎症因子以及氧化应激指标的变化来评定辅酶Q10对高原肺水肿的预防作用并试图探索其可能的机制。方法一、高原肺水肿模型的建立:40只雄性SD大鼠随机的分为4组1.正常组(n=10,常压);2.低氧暴露组(n=10,6000m)放于低压氧舱1天;3.低氧暴露(n=10,6000m)放于低压氧舱2天;4.低氧暴露(n=10,6000m)放于低压氧舱3天;然后麻醉处死老鼠,测量左肺上叶湿干比,HE病理切片下观察不同低氧暴露时间肺组织病理改变,确定最合适的造模条件。二、探讨辅酶Q10对SD雄性大鼠高原肺水肿的影响1.40只雄性SD大鼠随机的分为4组:1.正常组(n=10,常压);2.低氧暴露组(n=10,6000m);3.低氧暴露+30mg/kg辅酶Q10(n=10,6000m);4.低氧暴露+10mg/kg辅酶Q10(n=10,6000m);在放入低压氧舱前第三、第四两组先给予连续两天由5%cmcc溶解的辅酶Q10,在低压氧舱呆3天后,麻醉,处死老鼠,即刻取出各组老鼠的肺,肺组织用生理盐水洗干净之后用干燥的滤纸吸干组织水分之后,右肺上叶和中叶储存于㧟80℃冰箱中,下叶肺放于10%的福尔马林中;取下左肺上叶时立即测定用分析天平测定湿重,然后左肺上叶用冷的生理盐水(0.9%Na Cl)清洗后放到80℃烘烤72h后计算肺水肿指数,即肺湿干比。下叶肺病理切片的制备及HE颜色,右肺上叶和中叶做成组织匀浆,然后测定SOD(超氧化物歧化酶)、MDA(丙二醛)、GSH(还原型谷胱甘肽)、IL-10(白介素-10)、TNF-α(肿瘤坏死因子-α)、IL-6(白介素-6)、NF-Kb(核转录因子-KB)的变化。结果一、高原肺水肿模型的建立1.高原肺水肿模型的成功主要依靠衡量动物肺组织中的含水量,1天、2天、3天低氧暴露组与正常对照组相比肺湿干比明显增高(P0.01),由此可知成功建立了SD雄性大鼠高原肺水肿模型。2.HE切片显微镜下观察显示:与正常组相比,6000m,3天组高原低氧组肺泡中能观察到更多的白细胞渗出,肺组织毛细血管扩张,肺间质增生也较严重。3.确定6000m、3天为最合适造模条件。二、探讨辅酶Q10对SD雄性大鼠高原肺水肿的影响1.高原肺水肿模型的成功主要依靠衡量动物肺组织中的含水量,单纯低氧暴露组与正常对照组相比肺湿干比明显增高(P0.01),由此可知成功建立了SD雄性大鼠高原肺水肿模型。与单纯高原组比较,预防性服用辅酶Q10(30mg/kg剂量和10mg/kg剂量)均能起到降低肺部湿干比的效果(P0.01)。2.辅酶Q10对SD大鼠肺匀浆SOD、MDA、GSH的影响与正常对照组相比,低氧暴露组SOD水平降低(P0.01);在低氧暴露前给予辅酶Q10连续灌胃两天,与低氧暴露组相比,辅酶Q10(30mg/kg剂量和10mg/kg剂量)组SOD水平明显增高(P0.05),在低氧暴露前给予辅酶Q10连续灌胃两天,与低氧暴露组相比,辅酶Q10 30mg/kg剂量组GSH水平明显增高(P0.05),与正常组相比,低氧暴露组肺MDA水平明显增高(P0.01)。在低氧暴露前给予辅酶Q10 30mg/kg剂量的大鼠肺组织中MDA水平明显低于低压低氧组(P0.01)。3.辅酶Q10对SD大鼠肺部炎症因子的影响通过ELISA检测肺组织TNF-a、IL-10、IL-6的值,低氧暴露组大鼠肺组织中TNF-a水平明显高于正常对照组(P0.01),在低氧暴露前给予辅酶Q10(30mg/kg剂量和10mg/kg剂量)组肺组织中TNF-a水平明显低于低氧暴露组(P0.01)。该实验同时证实低氧暴露组IL-10水平明显低于正常对照组(P0.01),然而在低氧暴露前给予辅酶Q10 30mg/kg剂量组IL-10水平明显高于低氧暴露组(P0.01)。低氧暴露组IL-6表达量明显高于正常对照组(P0.01);与单纯低氧暴露组比较,低氧暴露前给予辅酶30mg/kg剂量辅酶Q10和10mg/kg辅酶Q10组IL-6表达量明显降低(P0.01)。4.NF-k B表达情况Western Blot检测发现低氧暴露组NF-Kb表达量明显高于正常对照组(P0.01);与单纯低氧暴露组比较,低氧暴露前给予辅酶30mg/kg剂量辅酶Q10和10mg/kg辅酶Q10组NF-Kb表达量明显降低(P0.01)。5.辅酶Q10对SD大鼠肺部病理的影响肺部组织切片显示:与正常组相比,高原低氧组肺泡中能观察到更多的白细胞渗出(P0.05),且低氧暴露组出血较为严重(P0.05),预防性给予辅酶Q10 30mg/kg组、Q10 10mg/kg组与高原低氧组比,白细胞渗出(P0.01)减轻。较高辅酶Q10剂量组肺水肿评分明显低于高原低氧组(P0.05)。中性粒细胞渗出同样低于高原低氧组(P0.05)。结论辅酶Q10对低氧暴露的SD雄性大鼠具有肺保护作用,低氧暴露前连续两天给予辅酶Q10灌胃能够有效的减轻肺水肿,其存在的可能机制是通过抑制由低氧引起的炎症反应和氧化应激来实现的。辅酶Q10可能成为人类预防高原肺水肿的一种有效药物。
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【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R594.3

【参考文献】