【摘要】：背景和目的:机体胆固醇代谢异常可导致动脉粥样硬化,动脉粥样硬化是致心脑血管疾病发生发展的主要原因之一,严重危害人类健康。改革开放以来,国民膳食结构发生重大改变,机体过多脂质摄入导致脂质代谢异常,心脑血管疾病的患病率逐年升高,研究脂质代谢异常及其导致动脉粥样硬化的发病机制从而阻止其发生发展是目前研究的重点。而TC(total cholesterol)和LDL-C(low-density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)在体内水平受到胆固醇合成和吸收的影响,临床上他汀类药物的主要作用是阻断胆固醇合成过程,依折麦布的主要作用是抑制胆固醇吸收,这些药物都是针对血脂异常的患者进行研发的且价格昂贵、具有一定的副作用,因此不能用于早期血脂异常发生的预防。机体血脂水平与日常膳食密切相关,那么从膳食因素入手进行血脂异常的早期干预不失为一个便利可行的有效措施。既往研究证实,膳食辣椒素能够激活血管平滑肌细胞上的瞬时受体电位香草醛亚家族1(transient receptor potential vanilloid subfamily member 1,TRPV1)通道从而影响细胞内胆固醇代谢,防止胆固醇在血管平滑肌细胞内堆积形成泡沫细胞,起到预防动脉粥样硬化的作用。已经证实,TRPV1在肠道中也有表达,且近年来有关肠道胆固醇吸收的报道逐渐增多,该过程涉及的尼曼-匹克C1型类似蛋白1(Niemann-Pick C1-Like 1,NPC1L1)、三磷酸腺苷结合盒转运子G 5/8(ATP-binding cassette subfamily G 5/8,ABCG5/8)及酯酰辅酶A胆固醇酰基转移酶1/2(Acy1 Coenzyme A:Cholesterol Acyltransferases,ACAT1/2)分子逐渐成为研究的热点。那么激活肠道TRPV1对于肠道胆固醇吸收的影响及机制目前尚不清楚,因此本研究主要关注辣椒素激活肠道TRPV1对肠道胆固醇吸收的影响及分子机制,为膳食辣椒素调节血脂异常提供有力依据。材料与方法:整个研究分为临床数据分析和基础实验。临床数据分析以正常人群作为研究对象,分为正常膳食组和嗜辣组。基础实验以C57BL/6J野生型和TRPV1-/-型小鼠作为研究对象,C57BL/6J野生型和TRPV1-/-型小鼠各随机分为普食组(Cont组),高脂组(HFD组)和高脂加辣椒素组(Hcaps组)。1.研究嗜辣人群和正常膳食人群一般情况和血脂信息并进行统计分析。2.选用C57BL/6J野生型和TRPV1-/-型小鼠作为研究对象,以TRPV1激动剂—辣椒素作为干预手段,记录小鼠体重等基本信息。3.采用生化检验技术检测血清TC、LDL-C、TG、HDL-C等生化指标。4.利用气相色谱-质谱联用仪检测小鼠血清中代表肠道胆固醇吸收的标志物,即菜油甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇。5.选用Caco-2细胞作为研究对象,以胆固醇微胶粒为刺激因子,以TRPV1激动剂—辣椒素、TRPV1受体拮抗剂—辣椒卓平作为干预手段,测定Caco-2细胞胆固醇外向转运率。6.采用蛋白免疫印迹等分子生物学技术,探讨PKA、LXR、NPC1L1、ABCG5/8、ACAT1/2蛋白在各组小鼠肠道中的表达情况。结果:1.正常膳食组与嗜辣组在性别、年龄、收缩压、舒张压、摄盐量、腰围、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)上比较差异无统计学意义(P0.05)。嗜辣组较正常膳食组总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)下降,差异有统计学意义(P0.05);校正性别、年龄、收缩压、舒张压、摄盐量、腰围及体重指数(BMI)后差异仍有统计学意义(P0.05)。2.野生型小鼠各组体重之间无明显差异;高脂组血清TC较普食组升高(P0.01),而高脂辣组TC较高脂组下降(P0.05)。TRPV1-/-型各组小鼠中高脂组较普食组体重升高(P0.05);高脂组TC较普食组升高(P0.01),而高脂辣组与高脂组TC比较差异无统计学意义。3.野生型小鼠干预后,高脂辣组较高脂组菜油甾醇/TC、豆甾醇/TC、β-谷甾醇/TC均下降(P0.05)。TRPV1-/-型小鼠干预后,高脂辣较高脂组菜油甾醇/TC、β-谷甾醇/TC均下降(P0.05),但高脂组较普食组豆甾醇/TC下降(P0.01)给予辣椒素干预后无明显变化。4.Caco-2细胞胆固醇转运率结果与对照组相比,微胶粒组细胞胆固醇外向转运率下降,差异有统计学意义(P0.05);加入辣椒素干预组较微胶粒组细胞胆固醇外向转运率升高,差异有统计学意义(P0.01)。5.肠道胆固醇代谢有关的信号分子的蛋白表达情况5.1野生型各组小鼠干预后,高脂组较普食组PKA及LXR蛋白表达上升(P0.01及P0.05),辣椒素干预后可以逆转该变化。TRPV1-/-型各组小鼠则无上述改变。5.2野生型各组小鼠干预后,高脂组较普食组ABCG5蛋白表达上升(P0.05),给予辣椒素干预后ABCG5蛋白表达进一步上升(P0.05);高脂组较普食组ABCG8蛋白表达下降(P0.05),辣椒素干预后ABCG8蛋白表达上升(P0.05)。TRPV1-/-型各组小鼠中高脂组较普食组ABCG5蛋白表达下降(P0.01);各组间ABCG8蛋白表达无上述趋势。两种类型各组小鼠NPC1L1蛋白表达无明显差异。5.3野生型各组小鼠干预后,高脂组较普食组ACAT1、ACAT2蛋白表达上升(P0.05及P0.01),高脂辣组较高脂组ACAT2蛋白表达下降(P0.05)。TRPV1-/-型各组小鼠中,ACAT2蛋白表达各组间无明显差异。结论:1.临床数据和实验动物研究表明膳食辣椒素能够降低机体血清LDL-C和TC水平。2.辣椒素激活TRPV1可降低小鼠血清中胆固醇吸收标志物水平。3.辣椒素激活TRPV1可上调ABCG5/8,下调ACAT2,促进肠道胆固醇外向转运,抑制肠道胆固醇酯化,从而降低血清TC水平。
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【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R589.2
【参考文献】
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2428555
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