白藜芦醇对佐剂性关节炎大鼠关节滑膜组织中MnSOD-SIRT3表达的影响

发布时间：2019-03-31 10:46

【摘要】：背景:在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的发病机理中,氧化应激性反应是一个重要因素致病因素,由于RA患者关节疼痛和功能受限等原因,患者需要长期治疗,改变了生活方式,使机体处于应激状态,出现脂质过氧化反应,增加了氧自由基(oxygen free radical,ROS)的生成,ROS在机体蓄积,引起机体损伤。目前,在RA动物模型的制备中,利用弗氏完全佐剂(Freund's complete adjuvant,FCA)制备佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠模型较为常用,因为在形态学上和RA改变相似,而且造模较为简单,因此,该模型常用于筛选RA药物。锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,MnSOD)是重要的金属抗氧化酶,存在于真核细胞线粒体中,可以将超氧阴离子自由基(superoxide anion free radical)(O.-)2特异性的转化为H2O2和O2,由于线粒体不仅是机体细胞中氧化磷酸化代谢和产生能量的场所,而且是自由基产生的重要场所,因此,在抗氧化损伤中线粒体作用显著。同时,在机体的线粒体中,存在去乙酰化酶(sirtuins,SIRTs)家族中的去乙酰化酶3(Sirtuin 3,SIRT3),SIRT3具有去乙酰化酶活性,在调节机体的线粒体能量代谢和抗氧化应激中具有作用。白藜芦醇(resveratrol,Res)是多酚类化合物,属于植物抗毒素,文献报道Res具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等功能,本研究体外探讨Res对RA是否具有抗氧化作用及与线粒体MnSOD-SIRT3信号通路的关系。目的:观察佐剂性关节炎(AA)大鼠体内的氧化应激状况,关节滑膜组织中锰超氧化物歧化酶(MnSOD)、去乙酰化酶3(SIRT3)的表达,体外培养滑膜细胞,检测Res对低过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)诱导的成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)增殖的影响,探讨线粒体MnSOD-SIRT3信号通路在Res抑制AA大鼠FLS改变中的作用。方法:10只SD大鼠足趾皮下注射0.1ml弗氏完全佐剂(Freund's complete adjuvant,FCA)诱导AA,另取10只大鼠,皮下注射等量磷酸缓冲盐溶液(phosphate-buffered saline,PBS)作为对照组;造模后d 28,股动脉放血处死大鼠,留取血清,应用分光光度计,检测两组大鼠机体的氧化应激指标,硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、羟胺法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力、比色法测定谷胱甘肽过氧化物酶(glutathion peroxidase,GSH-Px)活性;HE染色观察两组大鼠踝关节结构变化;免疫组织化学法SP法观察两组滑膜组织中去乙酰化酶3(SIRT3)、锰超氧化物歧化酶(MnSOD)蛋白的表达,并进行算机图像分析系统处理测定两种蛋白的平均光密度(optical density,OD)值。体外研究,组织块培养法培养大鼠滑膜细胞,羊抗大鼠血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecular-1,VCAM-1)多克隆抗体鉴定,CCK-8法观察Res对低浓度(5μmol/L)的H2O2对FLS的增殖影响,Western blot检测AA大鼠FLS的氧化应激相关蛋白SIRT3、MnSOD蛋白的表达。结果:(1)与正常组大鼠比较,AA模型大鼠血清氧化应激指标MDA含量、GSH-PX活性、SOD活力差异均显著(P0.01);HE染色显示,AA模型大鼠关节滑膜组织增生,炎细胞浸润;免疫组化染色呈现AA模型大鼠滑膜组织呈棕黄色颗粒或黄色颗粒,计算机图像分析结果模型组线粒体氧化应激SIRT3、MnSOD蛋白表达增加。(2)体外实验表明,免疫荧光染色显示,VCAM-1多克隆抗体鉴定为成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS);随着Res的浓度增加,低浓度H2O2处理的AA大鼠FLS增殖受抑,SIRT3、MnSOD蛋白表达降低。结论:AA模型组大鼠存在氧化应激状态,滑膜组织呈炎性表现,线粒体氧化应激蛋白在AA模型大鼠中表达增加;Res可抑制低浓度H2O2处理的AA大鼠FLS增殖,降低线粒体氧化应激蛋白SIRT3、MnSOD蛋白表达。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R593.22

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本文编号：2450834