甲状旁腺激素对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

发布时间：2019-06-08 11:51

【摘要】：目的:1.通过对大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的分离培养与鉴定,为实验提供了合格的细胞来源。2.探讨不同浓度甲状旁腺激素1-34(PTH1-34)对大鼠BMSCs成骨分化的影响及其可能的作用机制,进而为甲状旁腺激素治疗骨质疏松症提供实验基础与依据。方法:1.通过贴壁培养的方法分离培养骨髓间充干细胞并且对其进行鉴定。2.不同浓度PTH1-34(0、10-10、10-9、10-8mol/L)间断作用于BMSCs,以48个小时作为一个周期,前6个小时加药,后42个小时不加药,采用MTT法对BMSCs的增殖情况进行检测。3.不同浓度PTH1-34(0、10-10、10-9、10-8mol/L)间断作用于BMSCs,以48个小时作为一个周期,前6个小时加药,后42个小时不加药,采用PNPP法检测碱性磷酸酶(ALP)活性、放射免疫法检测骨钙素(BGP)含量和实时定量RT-PCR法检测Runx2 m RNA的表达量。4.采用数据软件包SPSS22.0对所有的数据进行处理。定量资料以均数±标准差(X±S)方式表示,组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验,P0.05有统计学意义。结果:1.在显微镜下观察,原代BMSCs培养3天后贴壁并呈现梭形,5天后排列呈集落状,10-14天左右铺满瓶壁;第三代BMSCs的生长曲线结果显示,前1-2天为潜伏期,3-5天为对数生长期,之后为平台期;细胞周期测定大部分处在G1/G0期;流式细胞分析仪测定BMSCs表面抗原标志物CD29、CD44阳性表达,CD45阴性表达;将BMSCs诱导分化成为成骨细胞后进行茜素红染色,可以观察到钙结节,将BMSCs诱导分化成为脂肪细胞后进行油红O染色,可以观察到脂滴。2.将不同浓度PTH1-34(0、10-10、10-9、10-8mol/L)间断作用于BMSCs,其增殖水平无明显变化,各组之间的比较差异无统计学意义(P0.05)。3.将不同浓度PTH1-34(10-10、10-9、10-8mol/L)间断作用于BMSCs,其ALP活性、BGP含量及Runx2 m RNA表达量较对照组均增加,其中以10-8mol/L PTH1-34组最高,且呈现浓度依赖关系,对照组与实验组,实验组组间比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:1.BMSCs在体外能被成功分离、纯化,并且具有高度的自我更新及多向分化潜能。2.PTH1-34可以促进大鼠BMSCs成骨分化。3.PTH1-34可能是通过上调Runx2 m RNA表达来促进大鼠BMSCs成骨分化。
[Abstract]:Objective: 1. Through the isolation, culture and identification of rat bone marrow mesenchymal stem cells (Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs), a qualified cell source was provided for the experiment. 2. To investigate the effect of different concentrations of parathyroid hormone 1 鈮，

本文编号：2495262