GDF-9转染的脂肪间充质干细胞治疗化疗性卵巢早衰大鼠

发布时间：2019-07-11 18:57

【摘要】：目的:研究上调生长分化因子-9(GDF-9)表达的大鼠脂肪间充质干细胞(ASC)输注治疗化疗性卵巢早衰(POF)大鼠的效果。方法:酶解贴壁法从大鼠脂肪中培养ASC,脂质体法转染p EGFP-N3-GDF-9质粒入ASC,并验证GDF-9表达。腹腔注射顺铂建立大鼠POF模型,1周后通过尾静脉分别回输ASC和ASC-GDF-9细胞,观察大鼠体重、卵巢重量、血清中雌二醇(E_2)、卵泡刺激素(FSH)和促黄体激素(LH)值,并分析卵泡形成情况。结果:ASC细胞生长旺盛能向成骨和脂肪细胞分化,转染后可顺利表达GDF-9蛋白,转染效率为(43±9.68)%。顺铂腹腔注射可降低大鼠体重伴随卵巢体积缩小,各级卵泡减少,E_2降低,FSH和LH明显升高。输注ASC-GDF-9细胞4次后,可显著增加各级卵泡数目和基质细胞密度,降低LH和FSH激素水平。结论:转染GDF-9的ASC经尾静脉输注后,可更好地改善卵巢功能,恢复各级卵泡的发育,改善激素紊乱状态。
文内图片：
图片说明： SC治疗组(ASC)和ASC-GDF9治疗组(ASC-GDF9)。Model组:尾静脉注射0．5ml生理盐水;ASC治疗组:将ASC细胞以1×106/ml悬浮，按2×106/kg细胞经尾静脉注射;ASC-GDF9治疗组:将转染2天后的ASC-GDF9细胞以1×106/ml悬浮，按2×106/kg细胞经尾静脉注射。3组均注射4次，每次间隔3天。最后一次注射治疗1周后，戊巴比妥麻醉大鼠，心脏取血收集血清备检测。另收集大鼠的两侧卵巢组织修整去除脂肪后称重照相，10%甲醛固定，脱水，石蜡包埋后，5μm切片，苏木精-伊红(hematoxylinandeosin，H＆E)染色，具体流程见图2。图1GDF-9真核表达质粒的构建与鉴定A:转染用质粒pEGFP-N3图谱;B:rGDF-9基因扩增基因电泳图;C:pEGFP-N3-GDF9质粒双酶切鉴定结果图2流程图1．4．3血液中相关激素和GDF-9的ELISA检测大鼠血清中E2、FSH和LH的浓度采用ELISA法检测。另取卵巢组织，4℃预冷的PBS漂去组织血渍，滤纸吸干残留的PBS;加冰预冷裂解液(ＲI-PA，含蛋白酶抑制剂)在4℃匀浆;将匀浆液用液氮反复冻融3次;室温静置30min，4℃、15000r/min离心1h，取上清，分装，－80℃保存备用。血清和组织裂解液中GDF-9浓度采用ELISA检测试剂盒检测。1．5统计学处理采用SPSS17．0统计学软件，数据以xs，

本文编号：2513395