新诊断2型糖尿病合并铁过载患者SLC40A1基因突变的研究

发布时间：2019-09-03 18:29

【摘要】：目的了解新诊断T2DM患者中铁过载发病状况,对12例新诊断T2DM合并铁过载患者(肝脏穿刺组织普鲁士蓝染色阳性)进行SLC40A1(NG_009027.1)基因测序并分析。方法收集2014年12月至2015年12月我院内分泌科新诊断T2DM患者共198例的病历资料,其中铁蛋白升高且行肝脏穿刺组织普鲁士蓝染色阳性患者12例,通过肝脏穿刺组织石蜡切片提取基因组DNA,采用PCR扩增SLC40A1基因各外显子片段,琼脂糖凝胶电泳确认、纯化后,双向直接测序。结果198例新诊断T2DM患者中铁过载发病率为6%;测序结果同GenBank中对应序列进行对比,12例新诊断T2DM合并铁过载患者SLC40A1基因第6个外显子区域均有1处碱基改变:c.663TC,但其编码的氨基酸未发生改变221VV,为同义突变。结论铁过载在新诊断T2DM患者中有一定发病率,原因可能并非SLC40A1基因突变所致,有待进一步研究。
【图文】：

图１１２例患者肝脏穿刺组织病理图普鲁士蓝染色结果（４００×）Ｆｉｇ１Ｌｉｖｅｒｂｉｏｐｓｙｔｉｓｓｕｅｐａｔｈｏｌｏｇｙｏｆ１２ｃａｓｅｓＰｒｕｓｓｉａｎｂｌｕｅｓｔａｉｎｉｎｇ（４００×）表２ＳＬＣ４０Ａ１各引物序列及ＰＣＲ退火温度Ｔａｂ２ＰｒｉｍｅｒｓｅｑｕｅｎｃｅｓａｎｄＰＣＲａｎｎｅａｌｉｎｇｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｆＳＬＣ４０Ａ１外显子ＥｘｏｎＰＣＲ引物序列ＰＣＲｐｒｉｍｅｒｓｅｑｕｅｎｃｅ目的片段长度Ｄｅｓｔｉｎａｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈ（ｂｐ）退火温度Ａｎｎｅａｌｉｎｇｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ（℃）１Ｆ５’－ＡＴＡＧＣＡＧＣＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＡＧＣＧ－３’Ｒ５’－ＧＴＡＧＡＧＴＴＧＣＴＴＧＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣ－３’１４９６２２Ｆ５’－ＡＴＧＴＡＣＧＴＧＧＴＴＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＡＧ－３’Ｒ５’－ＧＧＣＴＴＡＡＴＡＣＡＡＣＴＧＧＣＴＡＧＡＡＣＧ－３’２７７６０３Ｆ５’－ＡＡＴＧＴＡＧＣＣＡＧＧＡＡＧＴＧＣＣ－３’Ｒ５’－ＡＧＡＧＧＴＧＧＴＧＣＣＡＴＣＴＡＡＧ－３’４１５６４４Ｆ５’－ＧＡＧＡＣＡＴＴＴＴＧＡＴＧＴＡＡＴＧＴＡＣＡＣ－３’Ｒ５’－ＣＴＡＣＣＡＧＡＴＡＴＴＣＡＡＴＴＴＴＣＴＧＣＣ－３’２１０５８５Ｆ５’－ＴＴＡＡＡＣＴＧＣＣＴＴＧＴＴＴＡＧＴＧ－３’Ｒ５’－ＧＣＣＴＣＡＴＴＴＡＴＣＡＣＣＡＣＣＧ－３’２７８５６６Ｆ５’－ＴＴＧＴＧＴＡＡＡＴＧＧＧＣＡＧＴＣＴＣ－３’Ｒ５’－ＣＣＴＣＧＴＣＴＡＣＣＡＡＡＧＣＧＡＴＡ－３’４６０５６７－１Ｆ５’－ＧＣＴＴＴＴＡＴＴＴＣＴＡＣＡＴ

“变性、退火、延伸”循环３５次，７２℃延伸１０ｍｉｎ。ＰＣＲ产物编号后放置于－２０℃保存。４．ＰＣＲ产物测序：ＰＣＲ产物经琼脂糖凝胶电泳确认为所需目的片段，经纯化回收交由Ｔｈｅｒ－ｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司进行双向直接测序（美国ＡＢＩ３７３０基因测序仪），结果以Ｃｈｒｏ－ｍａｔｏｇｒａｍ文件报回，通过Ｍｕｔａｔｉｏｎｓｕｒｖｅｙｏｒ软件与ＧｅｎＢａｎｋ中ＳＬＣ４０Ａ１基因序列进行对比分析。（图２）图２各外显子片段ＰＣＲ产物电泳图Ｆｉｇ２ＥｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｇｒａｍｏｆＰＣＲｐｒｏｄｕｃｔｓｏｆｅａｃｈｅｘｏｎｆｒａｇｍｅｎｔ结果１９８例Ｔ２ＤＭ患者中，铁蛋白升高且经肝穿刺活组织检查铁染色阳性患者１２例，铁过载发生率约为６％。经双向直接测序检测，与Ｇｅｎｂａｎｋ中ＳＬＣ４０Ａ１基因序列进行进行对比分析，１２例新诊断Ｔ２ＤＭ合并铁过载患者ＳＬＣ４０Ａ１基因第６个外显子区域均有一处碱基改变：ｃ．６６３Ｔ＞Ｃ，但其编码的氨基酸未发生改变２２１Ｖ＞Ｖ，，为同义突变（图３）。由于铁代谢复杂，铁代谢相关基因有一定地理差异，本研究所检测Ｔ２ＤＭ合并铁过载患者铁过载发生的原因还需要进一步探索。讨论本研究发现，新诊断Ｔ２ＤＭ患者中铁过载发病率约为６％。排除常见铁过载原因后，选择铁蛋白升高且肝脏穿刺组织普鲁士蓝染色阳性患者１２例，进行ＳＬＣ４０Ａ１基因直接测序，该１２例患者第６个外显子区域均有一处碱基改变：ｃ．６６３Ｔ＞Ｃ，但其编码的氨基酸未发生改
【作者单位】： 湖北医药学院附属东风医院内分泌科;
【分类号】：R587.1


本文编号：2531514