急进高原对大鼠肝脏损伤作用及对CYP450酶的影响
发布时间：2019-12-04 06:37
【摘要】：肝脏CYP450酶对药物的生物转化是一个耗氧的过程。在高海拔地区,机体处于低压、低氧的环境,在这种苛刻的条件下,体内CYP450酶系的活动均受到不同的影响。CYP450酶的变化可能直接影响药物的疗效,并发生不良反应。因此,系统的研究CYP450酶在高原环境的变化具有重要意义。本实验主要研究急进高原后CYP450酶亚型的活性和蛋白表达量变化,对机制进行探究；给予药物(CYP450酶诱导剂和酶抑制剂)干预后考察CYP450酶活性的变化,探索在缺氧和药物的双重干预下CYP450酶活性的改变；检测大鼠生化参数的变化,观察肝脏病理和电镜的变化,评价急进高原缺氧对大鼠肝脏的损伤。将大鼠随机分为A：55m空白组、B：4300m实地空白组、C：4300m低氧舱模拟空白组,进行如下实验：①腹主动脉采血,血气分析仪测定血气；②腹腔静脉采血,测定主要生化指标；③取大鼠肝组织,分别固定进行病理及电镜观察；④剩余肝组织放入组织收集盒中液氮冷冻,提取肝微粒体,CO还原差示光谱法测定总CYP450和CYb5含量；⑤使用Promega公司P450-GloTMssays试剂盒测定各亚型酶活性；⑥Western blot法测定各亚型蛋白含量和PXR、CAR、AhR的蛋白表达量；⑦ELISA试剂盒测定肝组织匀浆液中IFN-γ, IL-1β, IL-2和IL-6的含量。同时,设置药物干预实验,方案如下：平原组和4300m高原实地组给予肝药酶诱导剂苯巴比妥(A1、B1),地塞米松(A2、B2),抑制剂异烟肼(A3、B3),西咪替丁(A4、B4)干预后测定酶活性的变化和细胞因子的变化。血气结果显示,急进高原组pCO2、pO2、 S02显著性降低,HCO3-、SBC、BE和BB显著性下降,指示大鼠在急进高原后,机体处于急性缺氧状态,代偿性反应起主要作用,且可能出现呼吸性碱中毒合并代谢性酸中毒。生化结果显示,急进高原组转氨酶升高,ALP、DBIL降低,提示大鼠的肝功能受到了不同程度的影响。病理切片结果显示,急进高原大鼠肝组织,可见不同程度的小叶中央静脉水肿,核固缩,中央静脉周围少量血管充血。电镜结果显示,急进高原组大鼠细胞水肿,甚至细胞器溶解,说明大鼠急进高原肝脏损伤严重。CYP450活性测定结果显示,急进高原后CYP1A2和CYP2C11活性显著性降低,而CYP3A1活性升高,CYP2D4组间无显著性差异(P0.05)。CYP450亚型蛋白含量测定结果显示,急进高原后CYP1A2和CYP2C11含量显著性降低,其余组间无显著性差异(P0.05)。在高原缺氧条件下CYP450的活性和含量都发生了改变,酶蛋白量的表达主要受核受体通路中细胞因子及低氧诱导因子的调控,其活性主要受到细胞因子的调控。核受体测定结果显示,PXR含量高原组较平原组显著性降低。分析细胞因子含量测定结果,急进高原后IFN-γ、IL-2、IL-1β和IL-6的含量与平原组相比均显著性上升,CYP450酶活性的改变与细胞因子水平变化有良好的对应关系。给予酶诱导剂干预后,苯巴比妥在平原组诱导CYP2C11和CYP3A1活性显著性上升,海拔4300m组CYP1A2、2C11和2D4的活性均显著性上升,CYP3A1的活性显著性下降40.63%。地塞米松诱导后,平原组CYP3A1和CYP2D4的活性显著性增加,急进4300m海拔CYP2C11和CYP2D4活性显著性上升,CYP3A1活性较4300m空白组显著性下降65.24%。给予酶抑制剂干预后,异烟肼在平原组抑制了CYP1A2活性。给予西咪替丁后,平原组CYP1A2活性下降39.63%。海拔4300m组CYP3A1活性显著性下降而CYP2C11活性升高。其余组间比较均无差异(P0.05)。55m海拔处,与空白组相比,苯巴比妥使IL-2和IL-6的含量显著性上升；地塞米松上调了IFN-γ、IL-2和IL-6的表达量；异烟肼和西咪替丁都增加了IFN-γ、IL-2和IL-6的表达量：各给药组IL-1β的表达量都显著性下降。急进高原给药组与4300m空白组相比：苯巴比妥使得IFN-γ、IL-1β和IL-2的含量显著性下降；地塞米松下调了IL-1β和IL-2的含量；异烟肼使得IFN-γ、IL-1p和IL-2的含量显著性下降；西咪替丁增加了IL-6的含量,IFN-γ和IL-1β的含量显著性降低。大量的研究工作已经证实了高原环境对CYP450存在着明显的影响,很多药物的不良反应基本都与常规药物的使用有关,药物代谢与CYP450酶息息相关,故高原环境对CYP450酶的影响急需进行深入的探究。本实验系统的研究了急进高原后主要负责药物代谢的四种CYP450亚型酶的活性和表达量的变化,并讨论了在药物干预下酶活性的变化。实验结果为解释高原药代动力学发生变化和药物的相互作用提供了参考依据和实验基础。
【图文】：
２．３．３．２逦ＣＹＰ４５０亚型活性测定结果逡逑检测化学发光强度可知，氋原环境对酶亚型活性的影响差异有统计学意义，逡逑结果如图２－１。ＣＹＰ１Ａ２活性随着海拔的升\龆档停耄磷橄啾龋隆ⅲ米榉皱义媳鸾档停担玻玻梗ズ停担常担埃ィ欢茫伲校常粒被钚裕伦榻希磷樯耄吡隋澹玻担常福ァｅ义希茫伲校玻茫保被钚裕伦榻希磷橄陆盗隋澹福埃埃
本文编号：2569513
【图文】：
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