NPPC基因真核表达质粒的构建及其表达检测

发布时间：2020-02-05 21:38

【摘要】：目的：CNP作为利钠肽家族中一种新型的利钠肽,其具有调节心血管系统、中枢神经系统等多方位的血管活性。本实验构建pEGFP-C1-NPPC真核表达载体、转化DH5a菌株,并转染人血管内皮细胞,获得含目的基因的菌株及对转染的细胞进行表达检测,有助于后续研究的进行,同时可为糖尿病下肢动脉闭塞的基因治疗提供新的选择。方法：以小鼠cDNA为模板,通过反转录PCR扩增NPPC基因片段,通过双酶切,定向亚克隆至pEGFP-C1载体,转化DH5a菌株并筛选,质粒提取,重组质粒经酶切正确,送测序公司测序。分别用pEGFP-C1空质粒及pEGFP-C1-NPPC转染人血管内皮细胞。对两组细胞进行蛋白质印迹法及荧光定量PCR监测,对比目的基因表达量差异。结果：1、酶切和测序图谱证明载体构建正确2、转染得到带抗性的菌株和细胞3、转入重组质粒组细胞目的基因表达量明显增加结论：构建pEGFP-C1-NPPC质粒成功,并可在真核细胞内实现高表达。
【学位授予单位】：昆明理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：Q78;R587.2

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本文编号：2576732