miR-335-5p对高糖状态下成骨细胞功能的影响

发布时间：2020-03-05 20:25

【摘要】：目的：观察miR-335-5p对高糖状态下成骨细胞增殖、凋亡的影响并探讨其可能分子机制。方法：用不同浓度葡萄糖培养MC3T3-E1成骨细胞,并分为正常对照组(葡萄糖浓度5.5mmol/L)、高糖组(葡萄糖浓度22.0mmol/L)、 agomir-335-5p组(转染agomir-335-5p,与浓度为22.0mmol/L的葡萄糖共培养)及agomir NC组(转染agomir阴性对照,与浓度为22.0mmol/L的葡萄糖共培养)。培养7天后,采用MTT比色分析法测定细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测细胞miR-335-5p与DKK1 mRNA的表达,Western Blot检测DKK1 及 caspase-3的蛋白表达水平。结果：(1)高糖组MC3T3-E1成骨细胞miR-335-5p的表达水平较正常对照组显著下调,agomir-335-5p组MC3T3-E1成骨细胞miR-335-5p的表达水平较高糖组与agomir NC组均明显上调(P0.05),而DKK1的mRNA表达水平在各组之间无显著差异。(2)与正常对照组相比,高糖组MC3T3-E1成骨细胞的增殖率明显降低,凋亡率显著增加,而与高糖组比较,agomir-335-5p组MC3T3-E1成骨细胞的增殖率明显增加,凋亡率显著降低(P0.05)。(3)高糖组MC3T3-E1成骨细胞DKK1和caspase-3的蛋白表达水平均显著高于正常对照组,而agomir-335-5p 组 MC3T3-E1成骨细胞DKKl与caspase-3的蛋白表达水平较高糖组与agomir NC组均显著降低(P0.05)。结论：高糖状态下,niR-335-5p可能通过转录后的调控机制抑制DKK1的蛋白表达,从而促进MC3T3-E1成骨细胞的增殖,抑制细胞凋亡,提示niR-335-5p可能成为防治糖尿病性骨质疏松的潜在目标。
【图文】：

骨细胞的调ｔ率较高糖沮降低了邋３６．１３％，，较巧ｏｍｉｒＮＣ绝降低了邋３２．４０％，差异均逡逑有统计学意义（户＜０．０５），但与正常对照组相比，差异无统计学意义（户＞０．０５）；高逡逑糖组与巧ｏｍｉｒＮＣ组之间无显著性差异（户＞０．０５），见

细胞ｍｉＲ－巧５－５ｐ的表达水平较高糖组与巧ｏｍｉｒ邋ＮＣ组均明显升高（Ｐ邋＜邋０．０５邋），但高逡逑糖组与巧ｏｍｉｒ邋ＮＣ组的差异无统计学意义（b6＞０．０５），ＤＫＫ１的ｍ民ＮＡ表达水平逡逑在四组间无显著性差异（户＞化0５）。见图２．３。逡逑１．２０邋１逡逑Ｉ：：：W逦．逡逑！：：：逦Ｉ逦ｉ逡逑含：：１邋Ｍ邋Ｍ逦Ｂ＿＿＿逡逑Ｃ饥１止0］逦Ｈｉｄｉ邋＾ｈｉｃｏＦｃ邋ｍｉＲ－５Ａ５＊？ｐ邋ｎｇｏｉｕｉｉ邋ＫＣ逡逑ａ）逡逑■邋ｌｉ邋１１１逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ邋Ｈｉｇｉｉ邋ａｌｕｃｏｓｃ邋ｉｎｉＲ－３３５－５ｐ逦巧ｏｍｉｒＮＣ逡逑ｂ）逡逑困２．３各组细胞ｍ瓜－巧５－５ｐ与ＤＫＫｌ邋ｍＲＮＡ表达情化逡逑Ｆｉｇｕｉ＊ｅ邋２．３邋Ｒｅｌａｔｉｖｅ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ邋ｏｆ邋ｎｉｉＲ－３３５－５ｐ邋ａｎｄ邋ＤＫＫｌ邋ｍＲＮＡ邋ｉｎ邋ｅａｃｈ邋ｇｒｏｕｐ．逡逑注：？b6邋＜邋０．０５邋Ｖ玉．Ｃｏｎｔｒｏｌ作邋＜邋０．０５邋Ｖ义邋Ｈｉｇｈ邋ｇｌｕｃｏｓｅ．逡逑２０逡逑
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R580;R587.1

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本文编号：2585105