古汉养生精对肾阳虚哮喘大鼠P62、TGF-β1表达的影响

发布时间：2020-03-31 00:11

【摘要】：目的:探讨古汉养生精对肾阳虚哮喘大鼠P62、TGF-β1表达的影响。方法:选取30只4周龄体质量为120±10g清洁级健康的雄性wistar大鼠,按随机数字表分成6组,每组5只:正常组(A组)、哮喘组(B组)、肾阳虚哮喘组(C组)、古汉养生精低、中、高剂量(分别为4ml/kg;8ml/kg;16ml/kg)+肾阳虚哮喘组(D、E、F组),以氢化可的松25 mg.kg~(-1).d~(-1)肌注制备肾阳虚模型,在该模型的基础上以卵蛋白(OVA)与氢氧化铝致敏、激发制备肾阳虚哮喘模型,治疗组于激发开始每天给予相应剂量古汉养生精灌胃。在末次激发24 h后取大鼠左肺组织行苏木精-伊红(HE)染色,应用图像分析技术测定Wat/Pbm、Wai/Pbm、Wam/Pbm等重塑指标;取右肺组织使用QPCR检测TGF-β1 mRNA的表达,Western blotting检测P62蛋白的表达情况。结果:1.HE染色:A组大鼠支气管结构完整,未见明显炎性细胞浸润,B、C组可见支气管粘膜和支气管壁周围炎症细胞的浸润,支气管管壁增粗,粘膜充血肿胀,平滑肌、基底膜增厚,而C组炎症细胞浸润及气道结构改变程度较B组明显,且可见管腔明显狭窄、塌陷,D、E、F组较C组上述改变明显减轻(P0.05),D、E、F组之间差异无显著性。2.QPCR测定:哮喘组较正常组大鼠肺组织中TGF-β1 mRNA表达量明显上升(P0.05),C组TGF-β1 mRNA表达量较B组上调(P0.05),D、E、F组TGF-β1 mRNA表达量较C组明显下降(P0.05),D、E、F组之间TGF-β1 mRNA表达量差异无统计学意义。3.Western blotting检测:B、C组较A组大鼠肺组织P62蛋白表达降低;C组较B组大鼠肺组织P62蛋白表达下降,治疗组与肾阳虚哮喘组比较P62蛋白表达明显上调(P0.05);不同剂量古汉养生精组P62蛋白表达比较差异无统计学意义。4.Image-proplus图像分析软件分析:B组与正常组比较Wat/Pbm、Wai/Pbm、Wam/Pbm值明显上升(P0.05),C组Wat/Pbm、Wai/Pbm、Wam/Pbm高于B组(P0.05),D、E、F组Wat/Pbm、Wai/Pbm、Wam/Pbm低于C组(P0.05),D、E、F组之间Wat/Pbm、Wai/Pbm、Wam/Pbm比较差异无统计学意义。结论:1.肾阳虚哮喘大鼠P62蛋白的表达下调,TGF-β1表达明显上调。2.古汉养生精对肾阳虚哮喘大鼠的气道重塑有抑制作用,可能机制与调控P62、TGF-β1的表达相关。
【图文】：

也是计算不出起始 DNA 拷贝数。只有在第二个阶段阶段，PCR 产物量的对数值与起始模板量之间才存在线性关系。基增产物不断累积，相应的荧光信分也不断的在增加，每进行一个循环就采集一次荧光信分5.8 熔解曲线不同的反应产物可以通过溶解曲线来反应，包括非特异性产物。基增反应完成后，通过调节温度同时监测每一步的荧光信分，来绘制溶解曲线，待双链DNA 发生变性后，荧光信分降低与荧光染料转变为游离状态相关，根据荧光信分改变的负的一次导数与温度作图，在基增产物的溶解温度上有一特征峰（Tm，DNA 双链解链 50％的温度），用这个特征峰就可以将特异产物与其它产物如引物二聚体区分开，因为它们在不同的温度溶解。单一峰，无非特异性产物，定量准确；出现杂峰，存在非特异性产物，定量不准确。实验结果为单一峰，说明无非特异性产物，，定量准确。

也是计算不出起始 DNA 拷贝数。只有在第二个阶段阶段，PCR 产物量的对数值与起始模板量之间才存在线性关系。基增产物不断累积，相应的荧光信分也不断的在增加，每进行一个循环就采集一次荧光信分5.8 熔解曲线不同的反应产物可以通过溶解曲线来反应，包括非特异性产物。基增反应完成后，通过调节温度同时监测每一步的荧光信分，来绘制溶解曲线，待双链DNA 发生变性后，荧光信分降低与荧光染料转变为游离状态相关，根据荧光信分改变的负的一次导数与温度作图，在基增产物的溶解温度上有一特征峰（Tm，DNA 双链解链 50％的温度），用这个特征峰就可以将特异产物与其它产物如引物二聚体区分开，因为它们在不同的温度溶解。单一峰，无非特异性产物，定量准确；出现杂峰，存在非特异性产物，定量不准确。实验结果为单一峰，说明无非特异性产物，定量准确。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R562.25

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本文编号：2608261