【摘要】：目的:研究白细胞介素(IL)-35在系统性硬化病(SSc)患者血清和皮肤中的表达,分析其与SSc相关特征的潜在关联,初步探讨IL-35在SSc发病中的作用。方法:收集41例初诊SSc患者和50例正常对照组的临床资料及标本,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测治疗前后SSc患者及正常对照组血清中IL-35的水平,检测治疗前SSc患者及正常对照组血清中干扰素(IFN)-γ、IL-17A、IL-4和IL-10的水平。流式细胞术(FACS)检测治疗前SSc患者及正常对照组外周血中T helper(Th)1,Th2,Th17和Regulatory T(Treg)淋巴细胞的比例。荧光定量PCR检测6例SSc患者和6例正常对照组皮肤组织中IL-17A、Epstein-Barr病毒诱导基因3(EBI3)、IL-12亚单位α(P35)、转化生长因子(TGF)-β1、I型胶原、叉头翼状螺旋转录因子(FOXP3)、白细胞介素12受体β2(IL-12Rβ2)和gp130的m RNA表达量。免疫组化分别6例检测SSc患者和6例正常人皮肤组织中IL-35亚单位EBI3蛋白和P35蛋白的表达水平。蛋白质免疫印迹法(Western blot)分别检测6例SSc患者和6例正常人皮肤组织中IL-35的相关信号传导及转录激活蛋白(STATs)的磷酸化激活水平。分析血清IL-35水平与Th1、Th2、Th17、Treg淋巴细胞、IFN-γ、IL-4、IL-17A、IL-10、皮肤硬化评分(MRSS)、胸部高分辨率CT(HRCT)评分的相关性;分析皮肤组织中IL-35与转化生长因子β1、I型胶原以及MRSS评分的相关性。结果:1、ELISA结果显示,与正常对照组相比,SSc患者血清IL-35水平明显增高(48.86±30.87 vs.83.48±55.76,pg/ml)(P=0.006),常规治疗3个月后显著降低(83.48±55.76 vs.54.68±32.22,pg/ml)(P0.001)。在治疗前,lc SSc和dc SSc患者的血清IL-35水平没有统计学差异(93.26±56.83 vs76.55±55.14,pg/ml)(P=0.696)。2、ELISA结果显示,与正常对照组相比,SSc患者血清IL-17A水平明显增高(17.72±5.28 vs.23.99±14.37,pg/ml)(P=0.002),血清IFN-γ水平明显降低(20.46±7.56 vs.12.28±5.14,pg/ml)(P=0.032),血清IL-4水平明显增高(18.95±8.75 vs.48.24±21.74,pg/ml)(P0.001),血清IL-10水平无统计学差异(1.86±1.10 vs.2.77±1.53,pg/ml)(P=0.152)。系统性硬化病患者血清IL-35水平与血清IL-4水平呈正相关(r=0.320,P=0.041),与SSc患者检测的其它细胞因子无关。3、SSc患者治疗前血清IL-35水平与胸部HRCT评分呈正相关(rho=0.316,P=0.044),与皮肤MRSS评分和病程无关;血清IL-4水平与胸部HRCT评分呈正相关(rho=0.424,P=0.006)。4、流式细胞术结果显示,与正常对照组相比,SSc患者CD4+INF-γ+Th1细胞比例明显降低(12.23±4.64 vs.7.24±2.11,P=0.007),CD4+IL-4+Th2细胞比例明显增高(2.47±0.89 vs.5.38±1.82,P=0.001),CD4+IL-17A+Th17细胞比例明显增高(0.93±0.28 vs.1.69±0.56,P=0.013),CD4+CD25+Foxp3+Tregs细胞比例没有统计学的差异(4.01±1.07 vs.3.56±0.97,P=0.294),SSc患者Th1细胞与Th2细胞的比值明显低于正常对照组,Th17细胞与Tregs细胞比值有高于正常对照组的趋势。且SSc患者血清IL-35水平与Treg细胞比例呈正相关(r=0.434,P=0.005),与Th1细胞比例呈负相关(r=-0.330,P=0.035)。5、荧光定量PCR结果显示,与正常对照组相比,SSc患者皮肤组织中IL-17A的m RNA表达量增多(1.02±0.24 vs.5.12±1.25,P=0.001),EBI3的m RNA表达量增多(1.04±0.33 vs.5.29±2.32,P=0.008),P35的m RNA表达量增多(1.01±0.17 vs.4.32±2.53,P=0.025),FOXP3的m RNA表达量增多(1.04±0.32 vs.3.42±1.70,P=0.026),TGF-β1的m RNA表达量增多(1.13±0.29 vs.3.55±1.20,P=0.002),I型胶原的m RNA表达量增多(1.11±0.30 vs.4.21±1.78,P=0.007),而IL-12Rβ2和gp130的m RNA表达量在SSc患者和正常对照组之间无统计学差异。其中IL-35的亚单位EBI3m RNA表达量与P35 m RNA表达量正相关;EBI3 m RNA和P35 m RNA表达量均与I型胶原m RNA表达量正相关,与患者皮肤MRSS评分无关。TGF-β1 m RNA表达量与P35 m RNA表达量、I型胶原m RNA表达量及患者皮肤MRSS评分正相关,与EBI3 m RNA表达量无关。6、免疫组化结果显示,与正常对照组相比,SSc患者皮肤组织中EBI3蛋白的平均光密度值(IOD值/面积)明显增高(0.378±0.038 vs.0.615±0.136,P0.001),P35蛋白的平均光密度值(IOD值/面积)亦明显增高(0.343±0.034vs.0.551±0.143,P=0.002)。7、Western Blot结果显示,与正常对照组相比,SSc患者皮肤组织中STAT1通路蛋白的磷酸化水平明显增高(P-STAT1/GAPDH:0.2221±0.0146vs.0.4609±0.0665,P0.05);STAT4通路蛋白的磷酸化水平也明显增高(P-STAT4/GAPDH:0.1986±0.0276 vs.0.4749±0.0609,P0.05)。结论:1、SSc患者的血清IL-35水平显著升高,升高的血清IL-35水平与IL-4水平呈正相关,与Treg细胞比例呈正相关,与Th1细胞比例呈负相关,且血清IL-35和IL-4水平均与SSc患者肺部纤维化严重程度呈正相关。IL-35可能和Th2样细胞因子协同作用,共同参与SSc患者肺部纤维化的发病。2、IL-35可能通过激活通路蛋白STAT1和STAT4与TGF-β1协同作用,共同参与SSc患者皮肤纤维化的发病。
【图文】：
白细胞介素-35 在系统性硬化病发病中的作用研究 2019 届硕士学位论文表 6：SSc 患者和正常对照组的细胞因子血清水平IL-17A IFN-γ IL-10 IL-4 治疗前 IL-35 治疗后 IL-35SSc 23.99±14.37 12.28±5.14 1.86±1.10 48.24±21.74 83.48±55.76 54.68±32.22对照组 17.72±5.28 20.46±7.56 2.77±1.53 18.95±8.75 48.86±30.87 -P 值 0.002*0.032*0.152 ＜0.001*0.006*-
与皮肤 MRSS 值无关（rho=-0.113，P=0.483），与病程无关（rho=0.076，P=0.637）。SSc 患者血清 IFN-γ水平与皮肤 MRSS 评分呈负相关（rho=-0.398，P=0.010），，血清 IL-4 水平与胸部 HRCT 呈正相关（rho=0.424, P=0.006），见图 2。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R593.2
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本文编号：
2633327
