脂肪干细胞旁分泌作用促进糖尿病皮肤创面愈合的实验研究

发布时间：2020-04-23 11:03

【摘要】：目的体外分离培养大鼠脂肪干细胞(Adipose derived stem cells,ASCs),制备脂肪干细胞来源的条件培养基(Adipose derived stem cells conditioned medium,ASCs-CM),探讨ASCs-CM对皮肤成纤维细胞的增殖、迁移及向肌成纤维细胞分化功能的影响。另外,通过体内动物实验观察ASCs-CM对糖尿病大鼠皮肤创面愈合的影响。方法取健康SD大鼠脂肪组织,采用酶消化法分离培养ASCs,通过细胞免疫荧光染色法鉴定脂肪干细胞。收集第5代ASCs的条件培养基,用超滤离心管进行浓缩,获得ASCs-CM。将成纤维细胞分为ASCs-CM组与低糖培养基组,分别记为处理组(ASCs-CM)和对照组(N-CM)。通过CCK-8实验和划痕实验观察ASCs-CM对成纤维细胞增殖和迁移功能的影响;通过Western Blot实验和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ASCs-CM对成纤维细胞向肌成纤维细胞分化功能的影响。用链脲佐菌素诱导糖尿病SD大鼠模型,成模后将大鼠随机分为ASCs-CM组和N-CM组,并制备糖尿病大鼠全层皮肤创面模型,在创面周围分别注射ASCs-CM或N-CM 0.5mL。分别在术后第4、8、12和16天测量残余创面面积,并取部分创面组织分别进行免疫组织化学染色和qRT-PCR检测α-SMA与TGF-β1的表达。结果本实验成功分离脂肪干细胞,通过免疫荧光鉴定,符合脂肪干细胞的特性。CCK-8实验和细胞划痕实验结果显示,ASCs-CM能显著促进成纤维细胞的增殖与迁移。同时,Western blot和qRT-PCR实验均验证了ASCs-CM能促进成纤维细胞向肌成纤维细胞分化,差异有统计学意义。动物实验显示,ASCs-CM组在术后的第4、8、12和16天的创面愈合率均显著高于N-CM组,差异统计学意义。免疫组织化学染色和qRT-PCR结果显示,在术后的第4天,ASCs-CM组的α-SMA表达高于N-CM组(P0.05);在术后的第4、8和12天,TGF-β1的表达量显著高于对照组,差异有统计学意义。结论本课题研究证明脂肪干细胞条件培养基可能通过促进创面中TGF-β1的分泌以及促进成纤维细胞的增殖、迁移与分化从而加速了糖尿病SD大鼠的创面愈合。
【图文】：

PCR扩增程序

显微镜下观察第三代脂肪干细胞形态
【学位授予单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R587.2

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本文编号：2637661