B族维生素对胰岛β细胞自噬的影响

发布时间：2020-05-12 10:35

【摘要】：国际糖尿病联盟数据显示,目前世界上有4.25亿糖尿病患者,预计到2045年这个数值将上升到6.29亿,其中中国患者占1.14亿。Ⅱ型糖尿病占糖尿病总数的90%左右。Ⅱ型糖尿病的两个主要致病因素是胰岛素抵抗和后期胰岛β细胞衰竭。B族维生素在治疗Ⅱ型糖尿病及其并发症都有改善,但其治疗机制尚不清楚。本文构建RIN-葡萄糖依赖性肠促胰岛素受体(GIPR)细胞模型,用于检测B族维生素对GIPR激活引起细胞中GIPR内吞,并利用细胞免疫荧光技术和western blot检测B族维生素评价胰岛β细胞自噬。研究结果如下:1.将质粒pCMV6-AC-GIPR/GFP转染至RIN-m5F细胞中,通过G418的筛选获得单克隆细胞株,该细胞通过多次传代都能稳定遗传。在荧光显微镜下可以看到绿色荧光分布均匀。用(D-Ala~2)GIP作用20min时细胞内出现荧光斑点,表明GIPR激动剂类药物的筛选模型构建成功。将该模型应用于评价B族维生素,结果显示在B族维生素(1×10~(-5)mol/L、1×10~(-6)mol/L、1×10~(-7)mol/L)作用于细胞后,都没有出现荧光斑点激活模型,而用(D-Ala~2)GIP作用于细胞在20min和40min都出现了荧光斑点。表明B族维生素没有激活GIP受体引起细胞内吞。2将B族维生素(每种设4个浓度梯度)处理后,通过细胞免疫荧光检测发现VitaminB1作用下的细胞自噬体没有增加,而在VitaminB2、VitaminB3、VitaminB5、VitaminB6、VitaminB7、VitaminB9、VitaminB12作用下细胞自噬点明显增加。用western blot检测自噬相关蛋白,发现VitaminB2、VitaminB3、VitaminB5、VitaminB6、VitaminB7、VitaminB9、VitaminB12处理后的RIN-m5F细胞,其LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值上调,P62蛋白水平下降,AMPK磷酸化水平上升,mTOR磷酸化不变,说明这7种维生素都是通过AMPK途径诱导胰岛β细胞自噬。
【学位授予单位】：湖南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R587.1

【参考文献】