Gαq在急性痛风性关节炎中的作用及其机制研究

发布时间：2020-05-24 18:42

【摘要】：背景:痛风性关节炎(GA)是由于尿酸盐晶体沉积于关节腔内而诱发的急性炎症反应,伴随大量炎症细胞的浸润和多种炎症因子的表达。已发现单核/巨噬细胞和粒细胞是参与GA发病的主要免疫细胞,IL-1β是其中的关键因子,然而GA中的炎症调控机制尚未完全明确。Gαq是Gq蛋白的α功能亚单位,参与多种免疫细胞的功能调控,而Gq是否参与痛风发病尚未见文献报道。方法:本课题首先收集GA患者及健康人(HC)外周血标本,RT-PCR法检测其WBC中GNAQ的表达,并分析GNAQ表达量与临床指标的相关性。接着,通过小鼠急性痛风气囊模型验证Gnaq参与MSU诱导的炎症反应。进一步,通过体外培养骨髓巨噬细胞(BMDM),研究Gαq是否调控BMDM中炎症因子的表达、NLRP3信号通路及BMDM的吞噬功能。结果:GA患者WBC中GNAQ基因的表达显著低于正常对照,且GA患者GNAQ基因的表达水平与其临床指标UA成负相关性。在小鼠急性痛风气囊模型中发现,Gnaq-/-骨髓嵌合鼠气囊内MSU募集的炎性细胞数目及诱导的细胞因子(IL-1β,IL-6,CXCL1)表达均显著高于WT骨髓嵌合鼠。在体外培养的骨髓巨噬细胞,我们发现MSU刺激后Gnaq-/-BMDM分泌的IL-1β等炎症因子明显高于WT BMDM,并且其吞噬功能、ROS的表达及NLRP3信号通路的活化也高于WTBMDM。结论:临床数据及体内外实验结果表明,Gαq通过负调控巨噬细胞炎症因子的分泌、吞噬功能、ROS的表达和NLRP3信号通路而参与MSU诱导的炎症。本课题初步探讨了MSU诱导的巨噬细胞的炎症过程中Gαq发挥的调控作用,补充了痛风的炎症调控机制,为痛风研究及治疗提供新的方向。
【图文】：

序列,引物,基因型,条带

别进行预实验和正式实验。小鼠ＤＮＡ鉴定的引物如表１０，其中引物Ｇａｑｌ和Ｇａｑ２扩增逡逑出是的７５０ｂｐ产物，引物Ｇａｑ２和Ｇｔｘｑ３扩增出是的４００ｂｐ产物，则根据ＰＣＲ产物条带的逡逑数目及分子量可判断小鼠基因型。如图３所示，通过电泳将扩增产物进行分离，然后使用逡逑仪器进行成像，只有７５０ｂｐ处条带的样本基因型为型，只有４００ｂｐ处条带的样本逡逑基因型为型，两个条带都有的样本基因型为叫＋／－型。逡逑表１０．邋ＰＣＲ鉴定小鼠基因型所需的引物序列逦＿逡逑引物名称逦序列逡逑Ｇａｑｌ逦ＡＧＧＧＣＣＣＡＴＧＡＧＧＡＣＡＴＧＴＡＴＧＣ逡逑Ｇａｑ２逦ＴＴＣＡＡＡＧＴＡＴＣＡＣＡＣＴＣＡＣＡＴＣＡＣＡＧ逡逑Ｇａｑ３逦ＡＧＧＡＴＣＴＣＧＴＣＧＴＧＡＣＣＣＡＴＧＧＣＧＡ逡逑图３．小鼠基因型鉴定的结果逡逑３８逡逑

气囊,小鼠,高峰时间

图６．检测气囊内炎症反应的高峰时间点。气囊造模第７天时，向气囊内注射ＭＳＵ逡逑３ｍｇ／ｌｍＬ，在束ＩＪ激的３ｈ、６ｈ、９ｈ、１２ｈ时间点处死小鼠，回收气囊灌洗液，分别检测灌洗逡逑液中的细胞总数和灌洗液上清中ＩＬ－１｜３的含量。Ａ．运用流式仪器的计数功能统计气囊中逡逑募集细胞的总数，募集细胞的高峰时间点为９ｈ邋（ｎ＝３）。Ｂ．Ｅｌｉｓａ法检测气囊上清中ＩＬ－ｌｐ逡逑的表达，ＩＬ－ｌｐ的高峰时间点为６ｈ邋（ｎ＝３）。逡逑本次研究选取的模型为小鼠气囊模型，其特点为打药简便、回收细胞方便快捷。气囊中的逡逑免疫细胞主要为中性粒细胞，并且这些细胞可检测到尿酸盐结晶的吞噬，与痛风性关节炎逡逑的临床特征类似［１３］。气囊模型的主要制备过程为：第１天，通过皮下注射５ｍＬ无菌空气，逡逑在小鼠背部制成体积适当的无菌腔体（如图５）；第３天，气囊中补加３ｍＬ无菌空气；逡逑４０逡逑
【学位授予单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R589.7

【参考文献】