3-甲基腺嘌呤对支气管哮喘小鼠气道炎症、气道高反应和黏液高分泌的影响

发布时间：2020-05-26 05:43

【摘要】：目的:1.通过对小鼠构建支气管哮喘(哮喘)模型,拟探讨3-甲基腺嘌呤(3-MA)对哮喘小鼠气道炎症、气道高反应和黏液高分泌的影响。2.研究3-甲基腺嘌呤改善小鼠哮喘的潜在机制。方法:将24只C57BL/6J雌性小鼠(6-8周)随机分成4组,即健康对照组(PBS组)、哮喘组(OVA组)、哮喘+3-甲基腺嘌呤组(3-MA组)、哮喘+4-苯基丁酸钠组(4-PBA组),每组各6只。采用卵清白蛋白(OVA)作为致敏剂与激发剂来处理OVA组、3-MA组和4-PBA组小鼠,从而构建哮喘模型;采用PBS溶液处理PBS组小鼠,从而构建空白对照模型,剂量同OVA溶液量。3-MA组小鼠在激发前2 h,行腹腔注射3-MA溶液(10mg/kg),构建药物干预组;4-PBA组小鼠在激发前2 h,行腹腔注射4-PBA溶液(1 g/kg),构建阳性对照组。通过检测4组小鼠气道高反应性Penh值、肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数、嗜酸粒细胞和中性粒细胞,以及肺组织的病理变化,确定哮喘模型的成功建立;通过观察4组小鼠气道高反应性Penh值,比较3-MA组与OVA组气道反应;通过观察4组小鼠气道及血管旁胶原沉积,比较3-MA组与OVA组气道及血管旁胶原容积分数;通过观察4组小鼠气道杯状细胞分泌水平和Muc5ac蛋白水平的表达,比较3-MA组与OVA组气道黏液分泌水平;通过检测4组小鼠肺组织中LC3B、Beclin1等蛋白水平的表达,比较3-MA组与OVA组细胞自噬水平;通过检测各组小鼠中Atf6、Chop和Bip等蛋白水平的表达,比较3-MA组与OVA组内质网应激水平。结果:气道高反应性Penh值检测显示,OVA组Penh值明显高于PBS组(P0.05);3-MA组和4-PBA组Penh值明显低于OVA组。细胞计数显示,OVA组BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞和中性粒细胞均显著高于PBS组(P0.05);3-MA组和4-PBA组BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞和中性粒细胞均显著低于OVA组。肺组织病理检查可见,OVA组气管和肺血管周围表现出明显的炎症细胞浸润,肺泡间隔增厚、结构破坏,平滑肌层增厚,胶原沉积和杯状细胞增生;3-MA组和4-PBA组气管和肺血管周炎症细胞浸润、肺泡间隔增厚、结构破坏,以及气道周围胶原沉积情况和杯状细胞增生均较OVA组明显减少(P0.05);PBS组未见明显病理损害、胶原沉积和杯状细胞增生。Western blot检测可见,OVA组LC3 II/I和Beclin1蛋白表达水平较PBS组均明显增加(均P0.05),Muc5ac蛋白表达水平较PBS组明显增加(P0.05),Atf6、Chop和Bip蛋白表达量较PBS组均明显增加,且差异均具有统计学意义(均P0.05)。3-MA组和4-PBA组LC3 II/I、Beclin1蛋白表达水平较OVA组均明显降低(均P0.05),Muc5ac蛋白表达水平较OVA组明显降低(均P0.05),Atf6、Chop和Bip等蛋白表达水平较OVA组均明显降低,且差异均具有统计学意义(均P0.05)。结论:3-MA可以改善哮喘小鼠的气道炎症反应,减轻气道高反应性Penh值,减少气道及血管旁胶原的沉积和抑制黏液高分泌,其机制可能能够部分抑制ERS有关。
【图文】：

嗜酸性粒细胞,总数,和中

图 2. 各组小鼠细胞总数、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞计数。Figure 2. Total cells, eosinophils, and neutrophils counts in each group of mice.注：与 PBS 组比较，aP <0.05;与 OVA 组比较，bP <0.05

肺泡炎,炎症,气道,病理切片

- 32 -图 3.A. 3-MA 对气道及肺泡炎症的影响(×100)；B.病理切片炎症评分。Figure 3. A. The effect of 3-MA on airway and alveolar inflammation;B. The inflammatory score of pathological sections.注：与 PBS 组比较，aP <0.05;与 OVA 组比较，bP <0.05
【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R562.25

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