糖尿病牙周炎患者牙龈卟啉单胞菌rag基因型检测及其发病机制研究

发布时间：2020-06-01 14:03

【摘要】：研究背景:慢性牙周炎(Chronic Periodontitis,CP)是一种慢性炎症性疾病,由牙菌斑引起,从而导致结缔组织附着丧失、牙槽骨支持丧失和牙周袋形成。糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)是一种慢性终身性疾病,是世界上最为严重的慢性健康问题之一。大量流行病学及临床资料显示,糖尿病与牙周炎相互影响,牙周炎可以诱发糖尿病,糖尿病可以增加牙周炎的发病风险及严重程度。牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)是引起牙周炎的主要病原菌,rag位点是牙龈卟啉单胞的致病岛基因之一,有研究表明rag基因与P.gingivalis致病性呈正相关,其毒性会影响牙周组织的损伤程度。rag-1、rag-2、rag-3和rag-4,是该位点在临床菌株中的四种不同基因分型,不同的基因分型其致病的能力也有所不同。研究表明将伴糖尿病的牙周炎患者同慢性牙周炎患者进行比较,发现前者牙周组织的损伤和炎症程度都高于后者。可能是因为持续高水平的血糖状态,引起的机体的氧化应激反应加重了牙周组织的损伤,另外还有可能和口腔微生态平衡的失调有关。不同分型rag基因在伴糖尿病牙周炎患者及慢性牙周炎患者之间的是否存在差异,从而导致前者牙周炎的炎症和破坏程度是否更为严重,目前尚无确切的研究报道,本文探讨了相关机制的研究。研究目的:通过分析P.gingivalis的阳性率和其rag基因型在正常人组、伴糖尿病牙周炎组及牙周炎组的分布情况,探讨糖尿病参与牙周炎发病的机制。研究方法:本试验共分为3组,每组选取20名受试者,分别为伴糖尿病牙周炎组,慢性牙周炎组,正常人组,其中伴糖尿病牙周炎患者及慢性牙周炎患者均选取重度牙周炎患者,分别采取唾液样本。通过PCR定性方法检测唾液中P.gingivalis及rag基因分型,然后采用统计学分析P.gingivalis的检出率以及rag基因分型在这三组的差异。研究结果:测试结果经16 S rDNA PCR法检测,结果显示唾液样本中P.gingivalis阳性检出率在伴糖尿病牙周炎患者中为[65%(13/20)],慢性牙周炎组为[70%(14/20)],正常人组为[40%(8/20)],三组比较无统计学差异(P0.05);rag-1基因在慢性牙周炎组的检出率为[45%(9/20)]明显高于伴糖尿病牙周炎组[5%(1/20)];有统计学意义(P0.05);rag-2基因在正常人组的检出率为[62.5%(5/8)]明显高于其他两组,有统计学意义(P0.05);rag-4基因在三组中的检出率无差异(P0.05),rag-3基因在三组中均未检测到。研究结论:1.伴糖尿病牙周炎患者唾液中rag-1型的牙龈卟啉单胞菌的检出率明显低于慢性牙周炎组,可能与伴糖尿病牙周炎患者的口腔微环境发生改变从而使rag-1表达降低有关;另外伴糖尿病牙周炎患者的牙周炎症状态也可能启动了牙龈卟啉单胞菌逃避宿主的免疫应答,使rag-1表达降低。2.正常人组中rag-2的检出率显著高于其他两组,表明存在于正常人口腔中的牙龈卟啉单胞菌主要以毒低的rag-2型为主,这也可能是正常人不发生牙周炎的原因之一。
【图文】：

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结果结果1P.gingivalis的PCR检测结果在本次实验的 60 个唾液标本中，总共检测出 P.gingivalis35 例，阳性率为 58.3％，其中伴糖尿病牙周炎组 13 例，慢性牙周炎组 14 例，正常人组 8 例，阳性检出率分别为 65％、70％、40%，P.gingivalis 在三组中的阳性检出率无统计学差异( P>0.05)。P.gingivalis16S rDNA PCR 产物电泳结果见图 1，P.gingivalis 在三组中的分布见图 2，，P.gingivalis 在三组中的检出情况见表 4。

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图2 P.gingivalis在三组中的分布Figure 2 Distribution of P. gingivalis in three groupsg-1基因型在各组间的检测结果将三组中35个P.gingivalis阳性的标本进行rag-1基因型特异性引物检测，共检1型12例，其中伴糖尿病的牙周炎组1例，慢性牙周炎组9例，正常人组2例，结性牙周炎组与伴糖尿病慢性牙周炎组存在显著差异，有统计学意义(P<0.05)。型特异性引物检测电泳图见图3，rag-1基因型在三组中的分布见图4，rag-1基组间的阳性检出例数及检出率见表5。
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R781.42;R587.1

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