miR379在利拉鲁肽改善糖尿病非酒精性脂肪肝中作用及其机制研究

发布时间：2020-06-04 01:18

【摘要】：目的:近年来研究发现micro RNAs的异常表达与肝脏脂肪代谢紊乱密切相关,利拉鲁肽可明显改善非酒精性脂肪肝(NAFLD)的肝脏脂肪变性和脂肪代谢紊乱,然而micro RNAs在利拉鲁肽改善NAFLD中的作用尚未阐明。因此本文欲探索miR379在利拉鲁肽改善NAFLD中的作用及其调节机制。方法:1、6周龄C57BL/6J雄性小鼠,除对照组外,其余各组高脂喂养2周后,链脲佐菌素腹腔注射建立糖尿病相关的NAFLD小鼠模型,造模成功后随机分为2组:糖尿病(DM)组、利拉鲁肽(Lira)组;模型组继续高脂喂养10周后,给利拉鲁肽组小鼠每日一次皮下注射利拉鲁肽,共注射4周。16周后肝脏组织HE和油红O染色检测肝脏组织病理学,TG试剂盒检测肝脏组织的甘油三酯(TG)变化,荧光定量PCR检测肝脏组织中miR379、IGF1、SREBP1c、FAS、ACC的m RNA表达水平,免疫印迹实验检测肝脏组织中AKT、p-AKT的蛋白表达水平;2、体外培养人源Hep G2细胞系,分为5组:对照(NC)组、棕榈酸(PA)组、利拉鲁肽组(Lira)、liraglutide miR379 mimic NC(Lira NC)组、liraglutide miR379 mimic(Lira miR379 mimic)组。除对照组外,其余各组均使用0.25m M PA建立体外NAFLD细胞模型,造模同时给予各药物组利拉鲁肽治疗或转染miR379 mimic NC、miR379 mimic。干预24小时后,TG试剂盒检测各组肝脏细胞内TG的变化,利用荧光定量PCR检测miR379、IGF1、SREBP1c、FAS、ACC的m RNA表达水平,免疫印迹实验检测AKT、p-AKT的蛋白表达水平。Hep G2细胞转染miR379mimic/inhibitor,利用荧光定量PCR检测IGF1、SREBP1c、FAS、ACC的m RNA表达水平。结果:1、肝脏组织HE和油红O染色发现:与对照组相比,DM小鼠肝脏组织明显空泡样变性和大量脂滴沉积,利拉鲁肽明显减轻肝脏空泡样变性和脂滴沉积。DM小鼠肝脏组织和PA组肝细胞的TG水平升高(P0.05),利拉鲁肽治疗后均下降(P0.05);2、与对照组相比,DM和PA组miR379表达水平升高(P0.05),IGF1m RNA表达水平降低(P0.05),p-AKT的蛋白表达水平下降,SREBP1c、FAS、ACC的m RNA表达水平均升高(P0.05);利拉鲁肽治疗后miR379表达水平降低(P0.05),IGF1m RNA的表达水平升高(P0.05),p-AKT的蛋白表达水平升高,SREBP1c、FAS、ACC1的m RNA表达水平均降低(P0.05)。与Lira NC组相比,Lira miR379mimic组TG水平升高(P0.05),miR379表达水平升高(P0.05),IGF1的m RNA和p-AKT的蛋白表达下降(P0.05),SREBP1c、FAS、ACC的m RNA表达水平均升高(P0.05)。3、当过表达miR379时,IGF1m RNA表达水平降低(P0.05);当抑制miR379表达时,IGF1m RNA表达水平升高(P0.05)。4、当抑制miR379表达时,肝细胞内TG含量及miR379表达水平降低(P0.05),IGF1的m RNA表达水平升高(P0.05),p-AKT的蛋白表达水平升高,SREBP1c、FAS、ACC的m RNA表达水平均降低(P0.05)。结论:1、在体内外NAFLD模型中,利拉鲁肽明显减轻NAFLD中肝细胞脂肪变性和脂滴沉积。2、利拉鲁肽通过抑制miR379的表达减少肝细胞内TG沉积。3、miR379特异性作用于靶基因IGF1。4、利拉鲁肽通过miR379调节的IGF1/PI3K/AKT信号通路减轻NAFLD中肝细胞脂肪变性和TG沉积。
【图文】：

20图 1、利拉鲁肽对肝脏脂肪变性和 TG 沉积的影响。A、肝脏组织 H&E 染色；B、肝脏组织油红 O染色；C、肝脏组织 TG 含量测定。NC:对照组；DM：小鼠 NAFLD 模型组；Lira：利拉鲁肽干预组。*、**与 NC 组相比，p*<0.05，p**<0.01；#、##与 DM 组相比，，p#<0.05，p##<0.01。3.2 利拉鲁肽下调小鼠肝脏中 miR379 的表达和激活 PI3K/AKT 信号通路3.2.1 利拉鲁肽对小鼠肝脏组织中 miR379 表达的影响

华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位de Guia 等人发现 db/db 鼠和肥胖患者肝脏组织中 miR379 的表达水高的 miR379 可能与 NAFLD 的发生密切相关，因此我们进一步探索链关的 NAFLD 小鼠模型中肝脏组织中 miR379 的表达及利拉鲁肽对其表与 NC 组相比，DM 组 miR379 的表达水平显著升高（p<0.05）,这与上述发现利拉鲁肽治疗后，与 DM 组相比，miR379 表达水平显著降低（p<能是利拉鲁肽减轻 NAFLD 的一个新的作用靶点。A
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R587.2;R575.5

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本文编号：2695667