西格列汀对糖尿病大鼠大血管病变自噬水平的影响及其机制研究

发布时间：2020-06-07 01:57

【摘要】：目的:1、建立糖尿病大鼠大血管病变模型,观察其胸主动脉组织自噬(Autophagy)相关蛋白的表达情况。2、西格列汀(Sitagliptin)干预糖尿病大鼠大血管病变模型,观察其胸主动脉组织自噬活性的变化并探讨其可能作用机制。方法:随机选取58只5周龄(体重约180g-200g)的SD大鼠,适应性喂养1周,随机分为正常对照组(A组,n=10)和模型组(n=48)。A组喂以普通饲料,模型组喂以高脂高糖饲料饮食。4周后,称体重(BW),测空腹血糖(FBG)、胰岛素(FINS)水平、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平。将造模组禁食12小时后以35mg/kg剂量STZ腹腔注射给药,A组腹腔注射等量的缓冲液,72小时后,测随机血糖(BS)连续3次≥16.7 mmol/L者确定为糖尿病大鼠(3只未建模成功)。造模成功的糖尿病大鼠继续予以高脂饲料喂养,并随机分为5组,B组:未干预组(n=9),C组:西格列汀5mg/kg·d组(n=9),D组:西格列汀1mg/kg·d组(n=9),E组:西格列汀5mg/kg·d组+CXCR4特异性抑制剂AMD3100 1mg/kg·d(n=9),F组:西格列汀1mg/kg·d组+CXCR4特异性抑制剂AMD3100 1mg/kg·d(n=9),C、D、E、F组每日9点以西格列汀溶于生理盐水灌胃,A、B组予以等量生理盐水灌胃,共干预8周,E、F组自实验第8周起每日腹腔注射AMD3100 1mg/kg·d。给药期间,B、C、F组各死亡1只老鼠。实验第12周末称体重后处死大鼠,心尖处取血3-4ml用于检测血生化指标、血清基质细胞衍生因子-1α(Stromal cell-derived factor-1,SDF-1α)水平,取各组大鼠胸主动脉段,一部分用于HE染色,一部分用于免疫组织化学染色,一部分用于Western-blot检测LC3-II(Microtubuleassoeiated protein 1 light hain 3-II)、P62、Beclin-1、Class III PI3K(Class III Phosphoinositide 3-kinase)、CXCR4蛋白表达。结果:1、4周末,各大鼠BW及生化指标比较,与A组相比,造模组大鼠BW、FBG、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C较正常组明显增高。2、12周末,各大鼠FBG、TC、TG、LDL-C指标比较:与A组相比较,B组、C组、D组、E组、F组FBG、TC、TG、LDL-C水平均增高,C组与B、D组比较,FBG、TC、TG、LDL-C水平有下降,与F组比较,E组FBG、TC、TG、LDL-C水平有下降,差异有统计学意义(P0.05)。3、12周末各组大鼠血清SDF-1α水平、胸主动脉组织CXCR4及自噬相关蛋白表达比较:与B组相比,C、D组血清SDF-1α、LC3-II、CXCR4、Beclin-1、Class III PI3K蛋白表达增加,P62表达减少,差异有统计学意义(P0.05),而C组与D组相比较,SDF-1α、LC3-II、CXCR4、Beclin-1、Class III PI3K蛋白表达增高更显著,P62表达减少更显著,差异有统计学意义(P0.05)。E组与C组比较,F组与D组比较,血清SDF-1α、LC3-II、CXCR4、Beclin-1、Class III PI3K蛋白表达增加,P62表达减少,差异有统计学意义(P0.05),E组与F组差异无明显统计学意义。结论:1、STZ诱导的糖尿病大鼠胸主动脉组织中LC3-II、Beclin-1、Class III PI3K表达下调,P62蛋白表达上调,自噬活性下降。2、西格列汀可能通过激活SDF-1α/CXCR4生物轴以调控自噬,从而进一步延缓糖尿病大鼠大血管病变。
【图文】：

表3 4周后两组大鼠血脂的比较（ x ±s）例数 TG(mmol/L) TC(mmol/L) LDL-C(mmol/L)10 0.70±0.13 1.78±0.19 0.35±0.0410 0.97±0.13a3.01±0.14a0.50±0.12a组（正常对照组）比较，，P＜0.05

图 1 4 周后两组大鼠 BW 比较（ x ±s，g）注：Control group:正常对照组；Model group:模型组注：a:与 A 组（正常对照组）比较，P＜0.05a
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R587.2

【参考文献】