脂肪组织特异性过表达nSREBP1c下脂肪分化体内外差异研究

发布时间：2020-06-19 13:29

【摘要】：目的:本研究使用脂肪代谢障碍转基因小鼠为研究对象,依据之前观察的脂肪分化体内外差异,即原本发育障碍的脂肪组织中提取的血管基质细胞离体之后能表现出脂肪生成能力的恢复,从小鼠代谢表征,脂肪组织特性,脂肪细胞族群特点为立足点,明确转基因小鼠代谢表征与脂肪组织内环境特性,寻找体内外脂肪分化调控的重要影响因素,通过在体验证来证实差异。方法:繁育脂肪发育障碍小鼠(aP2-nSREBP1c)至成年(12至14周龄)测定其血液主要代谢物血糖、血脂、胆固醇、脂蛋白等血液指标在性别,进食条件下的差异;测定其脂肪含量,明确脂肪分布情况;病理学观察发育中的脂肪特点;流式细胞术测定脂肪组织祖干细胞族群特性;测定小鼠机体脂肪潜在脂肪抑制因子的表达情况。适龄aP2-nSREBP1c小鼠(约12周龄)提取其腹股沟皮下脂肪,验证其离体之后的脂肪生成能力;建立稳定培养的脂肪源性干细胞,通过共培养体系观察其旁分泌网络对于脂肪生成的影响。从体内外的潜在成脂抑制因素中确定潜在的重要影响因子,通过通路抑制剂在体干预小鼠,观察其代谢表征,脂肪组织特性与成脂基因的变化,来评估干预措施的有效性,用以验证抑制因子的作用地位。结果:脂肪组织特异性过表达nSREBP1c的转基因小鼠正常脂肪组织功能障碍,脂质异位沉积严重,机体存在明显的糖脂代谢紊乱。小鼠脂肪组织代谢异常从幼龄开始,成年后明显影响机体代谢表征。特异性过表达nSREBP1c的脂肪组织由于抑制脂肪生成的细胞族群的支配作用,成脂分化趋向上趋于保守。脂肪组织内环境中,转化生长因子β(TGFβ)信号的有明显上调。离体之后,特异性过表达nSREBP1c的血管基质细胞和脂肪源性干细胞的分化保守性丧失,脂肪生成能力得到恢复,这些细胞的旁分泌作用下调了共培养体系中3T3-L1细胞的TGFβ通路的传导信号,并上调脂肪生成的相关基因。通过在体注射TβR抑制剂,可以发现抑制TGFβ通路能部分影响小鼠的脂代谢异常,通过上调脂肪组织成脂分化相关基因,下调分化抑制因子,改变脂肪组织的形态和功能来缓解机体的代谢异常。结论:脂肪组织特异性过表达nSREBP1c下,其体内环境中主管抑制脂肪生成的细胞族群处于支配地位,与上调的TGFβ信号一同构成脂肪生成的抑制环境。离体之后的脂肪血管基质细胞不再受到内环境调控,丧失分化保守性趋向,脂肪源性干细胞的旁分泌网络能下调TGFβ通路的信号传导。在体抑制TGFβ通路能够直接影响小鼠脂代谢,恢复脂肪功能,一定程度上改善代谢紊乱。综上所述,TGFβ通路在脂肪组织特异性过表达nSREBP1c所致的脂肪分化体内外差异中有重要的调控作用。
【学位授予单位】：广东药科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R589.2
【图文】：

19图 2-1 aP2-nSREBP1c 小鼠的体征指标A.雄鼠体重 B.雌鼠体重 C.雄鼠脏器重量 D 雌鼠脏器重量. E.雄鼠脏器比值 F.雌鼠脏器比值注：每组 4 只，与同窝野生型对照比较，*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001。Fig.2-1A. Male mouce body weight B. Female mouce body weight C. Male mouce organ weight DFemale mouse organ weight. E. Male mouse organ weight ratio F. Female mouse organ weight ratioNote: Compared with the WT group,*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001, n=4 per group.实验结果显示，生长过程中，aP2-nSREBP1c 转基因小鼠的体重增长比同窝野生

广东药科大学硕士研究生学位论文型小鼠明显；aP2-nSREBP1c 转基因小鼠重要代谢器官（肝脏，肾脏等）重量较其同窝野生型更重，附睾（雄）性腺周围（雌）明显缺乏，腹股沟皮下脂肪重量略轻，棕色脂肪（BAT），胰腺，肝脏存在明显的脂质沉积。略有以上实验结果表明，aP2-nSREBP1c 转基因小鼠表现出明显的脂肪发育障碍，伴有明显的脂质异位沉积。2.4.2 aP2-nSREBP1c 小鼠的体脂特征

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