人脐带间充质干细胞微泡对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞自噬水平影响的研究

发布时间：2020-06-20 07:03

【摘要】：目的:研究hUCMSC-MVs对RA-FLSs的自噬水平是否具有调节作用,探究hUCMSC-MVs作用于RA的机制。方法:购买hUCMSCs细胞系(SM-MSC)和RA-FLSs细胞系(MH7A),培养传代后用于实验。梯度离心法提取hUCMSC-MVs,透射电镜鉴定形态及Western Blot法鉴定其表面抗原表型。实验分为RA-FLSs组(空白对照组)、自噬抑制剂干预RA-FLSs组(3-MA干预组)、hUCMSC-MVs干预RA-FLSs组(hUCMSC-MVs干预组)。实验主要方法包括CCK8法测细胞增殖,流式细胞术测细胞凋亡,划痕实验法测细胞迁移,RT-qPCR法检测自噬相关基因BECN1、MAP1LC3B mRNA表达,Western Blot法检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3Ⅱ表达及LC3Ⅱ/Ⅰ比值。结果:1.hUCMSC-MVs对RA-FLSs增殖、凋亡及迁移能力的影响(1)细胞增殖:与空白对照组相比,10μg/mL MVs干预组、50μg/mL MVs干预组、100μg/mL MVs干预组细胞存活率均极显著增加(P0.001);与空白对照组相比,3-MA干预组、150μg/mL MVs干预组、200μg/mL MVs干预组存活率均极显著降低(P0.001);150μg/mL MVs干预组与200μg/mL MVs干预组相比无显著差异(P0.05);150μg/mL MVs干预组存活率与3-MA干预组相比差异不显著(P0.05)。(2)细胞凋亡:与空白对照组相比,3-MA干预组和hUCMSC-MVs干预组细胞凋亡率极显著增加(P0.01);hUCMSC-MVs组与3-MA组相比差异不显著(P0.05)。(3)细胞迁移能力:干预12h和24h后,与空白对照组相比,3-MA干预组、hUCMSC-MVs干预组细胞迁移率极显著降低(P0.01);hUCMSC-MVs干预组与3-MA干预组迁移率相比差异不显著(P0.05);干预48h后,与空白对照组相比,3-MA干预组和hUCMSC-MVs干预组均无统计学差异(P0.05)。2.hUCMSC-MVs对RA-FLSs BECN1、MAP1LC3 mRNA表达的影响(1)BECN1 mRNA表达:与空白对照组相比,3-MA干预组、hUCMSC-MVs干预组BECN1 mRNA表达显著降低(P0.01,P0.05);与3-MA干预组相比,hUCMSC-MVs干预组BECN1 mRNA表达显著升高(P0.05)。(2)MAP1LC3B mRNA表达:与空白对照组相比,3-MA干预组和hUCMSC-MVs干预组MAP1LC3B mRNA表达显著降低(P0.01,P0.01);与3-MA干预组相比,hUCMSC-MVs干预组MAP1LC3B mRNA显著升高(P0.05)。3.hUCMSC-MVs干预对RA-FLSs Beclin1、LC3Ⅱ蛋白及LC3Ⅱ/Ⅰ比值的影响(1)Beclin1蛋白表达:与空白对照组相比,3-MA干预组和hUCMSC-MVs干预组Beclin1蛋白表达显著降低(P0.05);hUCMSC-MVs干预组与3-MA干预组相比差异不显著(P0.05)。(2)LC3Ⅱ蛋白表达:与空白对照组相比,3-MA干预组和hUCMSC-MVs干预组LC3Ⅱ蛋白表达显著降低(P0.01,P0.05);hUCMSC-MVs干预组与3-MA干预组相比LC3Ⅱ蛋白表达差异不显著(P0.05).。(3)LC3Ⅱ/Ⅰ比值:与空白对照组相比,3-MA干预组和hUCMSC-MVs干预组LC3Ⅱ/Ⅰ比值显著降低(P0.001);hUCMSC-MVs干预组与3-MA干预组相比差异不显著(P0.05)。结论:1.hUCMSC-MVs干预可抑制RA-FLSs增殖和迁移,促进其凋亡;2.RA-FLSs存在自噬异常激活,hUCMSC-MVs通过抑制RA-FLSs自噬对RA发挥作用,为hUCMSC-MVs用于RA临床治疗提供理论基础和依据。
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R593.22
【图文】：

1. Microscopic observation of RA-FLSs cell morpho图 1 镜下观察 RA-FLSs 细胞形态细胞表面抗原表型鉴定鉴定 RA-FLSs 表面 CD90 阳性率＞95%，CDSs 表面表达 CD90（+）、CD45（-）、CD1

cytometry for detection of surface antigenic phen图 2 流式检测 RA-FLSs 表面抗原表型MVs 鉴定MVs 形态学鉴定观察到 hUCMSC-MVs 直径介于 40-300n构，符合国际公认的鉴定 MVs 的标准。

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 汪艳;;调控自噬在临床肝病治疗性应用的转化研究[J];肝脏;2019年07期

2 牟婕;冯文静;王珊;冯美苹;毛拥军;;自噬调控衰老的研究进展[J];中华老年多器官疾病杂志;2019年01期

3 李黎;季漪;李文婷;马艳霞;李沐涵;吴勉华;;基于细胞自噬的中医药抗肿瘤作用研究进展[J];中华中医药杂志;2019年01期

4 韩苏夏;蔡梦娇;;自噬在肿瘤治疗策略中的角色[J];西部医学;2018年09期

5 周岐鸣;刘洋;季光;宋海燕;;调节自噬改善非酒精性脂肪性肝病的药物研究进展[J];中华中医药学刊;2018年10期

6 李晓琼;何玲玲;李新毅;;自噬与中枢神经系统退行性疾病研究进展[J];中风与神经疾病杂志;2018年10期

7 马文科;戴舒惠;罗鹏;杨悦凡;费舟;;线粒体自噬的研究进展[J];现代生物医学进展;2017年06期

8 付婉;董笛;赵颖;;自噬的相关分子机制[J];中国生物化学与分子生物学报;2017年05期

9 方聪聪;毛善平;董慧敏;刘宝辉;王舜;;线粒体自噬与中枢神经系统疾病关系的研究进展[J];卒中与神经疾病;2017年02期

10 李旭卉;吴习习;张凯;罗海霞;李敏;;线粒体自噬与癌症关系的研究进展[J];动物医学进展;2017年09期

相关会议论文 前10条

1 肖伊宁;吕佩源;;选择性自噬的研究进展[A];7th中华医学会神经病学分会全国中青年神经病学学术大会暨第十届全国神经系统感染性疾病与脑脊液细胞学学术大会论文汇编[C];2014年

2 胡成枫;胡春兰;陈良标;;自噬在斑马鱼细胞冷应激过程中的作用机制探究[A];2017年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2017年

3 肖伊宁;吕佩源;;选择性自噬的研究进展[A];中华医学会第十七次全国神经病学学术会议论文汇编（下）[C];2014年

4 秦正红;粱中琴;陶陆阳;黄强;刘春风;蒋星红;倪宏;邢春根;;自噬在细胞生存与死亡中的作用[A];中国药理学会第九次全国会员代表大会暨全国药理学术会议论文集[C];2007年

5 秦正红;;自噬与肿瘤和神经细胞生存——药物作用的新靶位[A];全国生化与分子药理学药物靶点研讨会论文摘要集[C];2008年

6 余慧芬;唐李;李妍;;自噬现象对肿瘤发生影响的研究进展[A];2017第七届泛环渤海生物化学与分子生物学会学术交流会论文集[C];2017年

7 王菲菲;邱学敏;王凌;;自噬对骨代谢的调节作用[A];第9届中国中西医结合学会妇产科专业委员会第二次学术会议论文集[C];2017年

8 申森森;李林楠;徐林楠;白玉;刘虎威;;基于气相色谱-高分辨质谱的饥饿诱导小鼠胚胎成纤维细胞自噬过程的代谢组学研究[A];第21届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集[C];2017年

9 任栓成;倪娜娜;胡志安;;睡眠觉醒期神经元自噬活动的变化[A];中国睡眠研究会第九届学术年会汇编[C];2016年

10 蒋绪顺;;自噬在棕榈酸诱导的足细胞凋亡中的作用及机制[A];2016年中国中西医结合学会肾脏疾病专业委员会学术年会论文摘要汇编[C];2016年

相关重要报纸文章 前10条

1 记者 李洁尉　通讯员 周飞;花榈木通过“自噬”杀死癌细胞[N];科学时报;2011年

2 王建新 主持;“自噬”的快车刚刚启动[N];医药经济报;2016年

3 记者 周洁;解密“自噬”，抗癌治病更近一步[N];河北日报;2016年

4 记者 陆琦 见习记者 谷双双;细菌通过诱导线粒体自噬求存活[N];中国科学报;2019年

5 本报记者 房琳琳;“自噬机制”带来对抗衰老新希望[N];科技日报;2016年

6 生命学院;俞立课题组在《科学》发文揭示自噬调控的重要机制[N];新清华;2012年

7 本报实习生 刘如楠 记者 李晨阳;最新研究揭秘植物是怎样衰老的[N];中国科学报;2019年

8 本报首席记者 唐闻佳;上海与新科诺奖得主颇有学术缘[N];文汇报;2016年

9 记者 陶婷婷;成功揭示代谢降解调控新机制[N];上海科技报;2013年

10 记者 白毅;浙大二院发现大气颗粒污染诱导呼吸道自噬性损伤新机制[N];中国医药报;2015年

相关博士学位论文 前10条

1 包丽丽;mTORC1调控TNF-α诱导的HUVECs凋亡与自噬的机制研究[D];内蒙古大学;2019年

2 邵童;自噬缺陷在早发性卵巢功能不全发病中的作用及机制研究[D];山东大学;2019年

3 王春燕;免疫性血小板减少症患者血小板自噬异常及干预策略[D];山东大学;2019年

4 何茳萍;SIRT6促进自噬与胆固醇流出及对巨噬细胞泡沫化的保护作用[D];上海交通大学;2017年

5 孙兰弟;基于提高亲电性的策略设计天然导向的抗炎试剂和自噬激活剂及其作用机制研究[D];兰州大学;2015年

6 杨烽;Klotho对糖尿病肾脏病中细胞自噬作用的影响及其机制研究[D];南方医科大学;2018年

7 曹文婷;miR-125b-5p在UVB影响SLE自噬中的作用机制[D];昆明医科大学;2018年

8 孙晓琪;雌二醇通过G蛋白偶联雌激素受体30 (GPR30)/ERK1/2信号通路调节MC3T3-E1细胞线粒体自噬的分子机制研究[D];中国医科大学;2018年

9 刘永一;自噬在棕榈酸诱导骨髓间充质干细胞凋亡中的作用及机制研究[D];中国医科大学;2018年

10 陈树东;慢性颈脊毮压迫的临床转归及自噬在脊毮运动神经元中的作用[D];广州中医药大学;2016年

相关硕士学位论文 前10条

1 邹晓琳;EV71诱导人神经细胞SH-SY5Y自噬及凋亡的机制研究[D];武汉科技大学;2019年

2 韩菲;阿托伐他汀抑制炎症反应中自噬的调控作用及其机制研究[D];上海交通大学;2017年

3 张琮;自噬对IBD肠上皮屏障功能的影响和作用机制研究[D];上海交通大学;2017年

4 赵娜;跑台运动对TgAPP/PS1小鼠海马线粒体自噬的影响研究[D];华东师范大学;2019年

5 孟冬筱;卡维地洛对人肝星状细胞自噬与凋亡影响的研究[D];山东大学;2019年

6 张松;Beclin-1基因沉默对前列腺增生上皮细胞BPH-1自噬及凋亡作用机制的研究[D];福建医科大学;2018年

7 陆陈晨;MORN4和NR4A2影响A549细胞线粒体自噬的分子机制研究[D];山东大学;2019年

8 田晓琳;亚慢性砷氟暴露对大鼠心脏毒性的影响及自噬相关基因的表达变化[D];山西医科大学;2019年

9 张敏;血管紧张素-（1-7）对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞自噬的影响及机制[D];山西医科大学;2019年

10 崔永佳;PI3K/Akt/mTOR信号通路在脂多糖诱导的大鼠肝星状细胞自噬中的作用[D];山西医科大学;2019年

本文编号：2722054