滤泡辅助性T细胞相关的肠道免疫在非肥胖2型糖尿病发病机制研究

发布时间：2020-06-20 06:58

【摘要】：研究目的:2型糖尿病(Type 2 diabetes,T2D)的发病机制复杂多样,目前大多数对于2型糖尿病的研究都集中在基于肥胖水平的发病机制的研究。然而,许多个体在非肥胖体重指数(Body mass index,BMI)水平上发展为T2D。目前尚不清楚在这些肥胖模型中发现的病因机制是否全部适用于非肥胖的T2D患者。近来的研究表明肠道菌群、肠道免疫和炎症反应在T2D等多种疾病的发病过程中可能起到重要作用,我们试图通过研究阐明滤泡辅助性T细胞(Follicular helper T cell,Tfh;又名CD4~+CXCR5~+T细胞)在肠道免疫中的作用找到潜在的治疗靶点为将来T2D的治疗及肠道免疫和肠道炎症的调节提供新思路。研究方法:首先我们对24名非肥胖T2D患者、14名BMI匹配的健康对照和11名活动性克罗恩病(Crohn's disease,CD)患者的粪便样本中的免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)组成进行比对分析。这些受试者中共有4名健康对照和10名非肥胖T2D患者愿意捐赠肠粘膜活检样本。这10名非肥胖T2D患者中有4名提供了2份,3名提供了3份,3名提供了4份肠粘膜活检样本。我们对愿意提供样本的全部受试者的肠粘膜样本的B细胞进行Ig亚型组成和Tfh细胞细胞因子分泌分析。然后我们选用6份非肥胖T2D患者样本进行了去除CD4~+CXCR5~+T细胞和中和IFN-γ的实验。最后我们使用4份健康对照组粘膜样本和7份非肥胖T2D粘膜样本用于大肠杆菌刺激实验,并用流式细胞术测量其IFN-γ表达。其中统计方法按照图例所示,相应地应用t检验、配对t检验或Mann-Whitney U检验,Wilcoxon符号秩检验。多组样本的比较依正态性和方差齐性选择采用方差分析或Kruskal-Wallis H检验,若多组间的比较总体上具有统计学意义,则进一步采用多重比较的方法进行事后检验(post-hoc test)。使用Graphpad Prism 5软件进行统计分析,P0.05认为差异有统计学意义。研究结果:1.非肥胖T2D患者的粪便IgG水平高于BMI匹配的健康对照,但低于活动性克罗恩病患者。2.非肥胖T2D患者肠道粘膜中CD4~+CXCR5~+T细胞表达IFN-γ的细胞的百分比显著升高,而表达IL-4和IL-17的细胞的百分比显著降低。3.当去除CD4~+CXCR5~+T细胞后及加入多克隆兔抗人IFN-γ中和抗体后IgG产生明显降低。4.非肥胖T2D患者与健康对照组肠道粘膜CD4~+CXCR5~+T细胞在大肠杆菌刺激后IFN-γ分泌均增加,但非肥胖T2D患者IFN-γ分泌更显著。结论:1.非肥胖T2D患者肠道呈现低级炎症反应,其介于健康对照组和活动性克罗恩病患者之间。2.非肥胖T2D患者肠道粘膜中CD4~+CXCR5~+T细胞高表达IFN-γ而低表达IL-4和IL-17。3.CD4~+CXCR5~+T细胞和IFN-γ可能在非肥胖T2D患者肠道IgG炎症中发挥重要作用。4.非肥胖T2D患者的肠道CD4~+CXCR5~+T细胞较BMI匹配的健康对照组对肠道细菌的炎症反应更强。
【学位授予单位】：中国人民解放军海军军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R587.1
【图文】：

H检验的事后检验（又称Dunn’s test）），每行会检验零假设：样本1和样本2分布相同。调整后的检验水准为0.05，作为表格中最后一列P值（多重检验后调整的P值）的判定标准。图1. 健康对照、非肥胖T2D和CD受试者的粪便样本中的Ig亚类组成。通过涡旋使样本溶解并离心沉淀，ELISA测量IgG和IgA浓度。

+T细胞表达IFN-γ的百分比显著高于健康对照组，而表达IL-4的百分比显著降低（图2A）。但健康对照组和非肥胖T2D患者肠粘膜总的CD4+CXCR5+细胞数相当（图2B）。在全部粘膜CD4+T细胞中，非肥胖T2D患者肠粘膜CD4+CXCR5+T细胞表达IFN-γ的百分比显著高于对照组，而表达IL-4的百分比显著降低（图2C）。在全部肠粘膜样本中，非肥胖T2D患者CD4+CXCR5+T细胞表达IFN-γ的百分比较健康对照组显著升高，而表达IL-4和IL-17的百分比显著降低（图2D）。图2A.样本肠粘膜CD4+CXCR5+T细胞中表达IFN-γ、IL-4和IL-17的百分比，并使用荧光同型阴性对照。使用Mann-Whitney U检验。

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本文编号：2722049