骨髓间充质干细胞移植在小鼠生育功能重建中的应用价值

发布时间：2020-06-26 23:16

【摘要】：第一部分骨髓间充质干细胞移植对卵巢早衰小鼠卵巢功能及生育能力的影响目的：探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)移植对化疗药物所致卵巢早衰(premature ovarian failure, POF)小鼠卵巢功能及生育能力的影响。方法：通过一次性腹腔注射环磷酰胺(CTX) 120mg/kg和白消安(BUS) 12mg/kg建立卵巢早衰小鼠模型。将本实验动物分为三组：建模移植组、建模对照组和空白对照组。建模后14天,将带有绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)转基因小鼠的骨髓间充质干细胞经尾静脉注射至建模移植组小鼠体内,并取等量生理盐水经尾静脉注射至建模对照组和空白对照组小鼠体内。饲养2个月后,采用原位末端转移酶标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling,TUNEL)检测卵巢颗粒细胞凋亡情况及小鼠血清FSH和E2水平,观察各组超促排卵后的获卵数、受精率、卵裂率、囊胚形成率,以及与雄性小鼠合笼后生育子代的数量。结果：①血清性激素空白对照组FSH和E2水平在实验前后均无明显变化。建模对照组在化疗药物注射后14天,FSH水平显著升高,E2水平显著下降。BMSCs移植后2个月,建模移植组FSH水平明显下降,E2水平明显上升,与空白对照组无显著性差异。②卵巢颗粒细胞凋亡情况化疗药物注射后14天空白对照组可见少量凋亡颗粒细胞,建模对照组卵巢卵泡中出现大量凋亡颗粒细胞,凋亡指数显著高于空白对照组。BMSCs移植后2个月,建模移植组卵巢卵泡内凋亡颗粒细胞明显减少,凋亡指数显著低于建模对照组。③获得卵母细胞受精情况及囊胚形成率空白对照组获得卵子数及受精率、卵裂率、囊胚形成率在实验前后均无明显变化；建模对照组小鼠化疗药物注射后14d, 获得卵子数及受精率、卵裂率、囊胚形成率明显下降；BMSCs移植后2个月,建模移植组获得卵子数及受精率、卵裂率、囊胚形成率明显上升,与空白对照组无显著性差异。④生育子代情况骨髓间充质干细胞移植2个月后,空白对照组共生育小鼠24只,建模对照组未生育出小鼠；建模移植组共生育小鼠6只。结论：骨髓间充质干细胞移植可显著降低卵巢颗粒细胞凋亡数量,改善卵巢内分泌功能,提高小鼠生育能力。第二部分骨髓间充质干细胞移植在卵巢早衰小鼠卵巢内的定位目的：探讨骨髓间充质干细胞移植后在小鼠卵巢内的定位及分化情况。方法：BMSCs移植后2个月,荧光显微镜下观察卵巢冰冻切片内绿色荧光蛋白及类固醇激素细胞的表面标记的表达情况,并采用免疫组化方法镜下观察BMSCs在卵巢内的定位。结果：BMSCs移植后2个月,可见卵巢间质内存在大量绿色荧光细胞和标记BMSCs,但定位存活的细胞并不表达类固醇激素分泌细胞的表面标记FSHR。结论：骨髓间充质干细胞可定位存活于卵巢间质中,但并未分化为有功能的卵巢颗粒细胞。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R711.75;R457.7
【图文】：

颗粒细胞,卵巢,建模,化疗药物

逡逑如图１所示，空白对照组小鼠卵巢内散在极少量栋黄色调ｔ颗粒细胞，调亡指逡逑数为７．０％；化疗药物注射后Ｈｄ，小鼠卵巢内出现大量od亡颗粒细胞，呈栋黄色逡逑深染，调ｔ指数为３７．８％；邋ＢＭＳＣｓ移植后２个月，建模移植组小鼠卵巢内踪黄色调逡逑ｔ颗粒细胞明显减少，调亡指数为１７．邋８％，明显低于建模对照组３４．０％，差异具有逡逑显著性。逡逑WWW逡逑ＡＢＣ逡逑图１邋ＢＭＳＣｓ移植后２个月Ｈ组小鼠卵巢颗粒细胞调ｔ的比较（Ａ；空白对照组卵巢，Ｂ：逡逑建模对照姐卵巢，Ｃ：建模移植组卯巢，Ｘ４００）逡逑Ｆｉｇ．邋Ｉ邋Ｔｈｅ邋ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ邋ｏｆ邋ｇｒａｎｕｌｏｓａ邋ｃｅｌｌｓ邋ａｐｏｐｔｏｓｉｓ邋ａｍｏｎｇ邋ｔｈｒｅｅ邋ｇｒｏｕｐｓ邋２邋ｍｏ打ｔｈｓ邋ａ巧ｅｒ邋ｔｈｅ逡逑化ａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ＢＭＳＣｓ邋（Ａ邋！邋ｔｈｅ邋ｂｌａｎｋ邋ｇｒｏ叫；Ｂ：邋ｔｈｅ邋ｍｏｄｅｌ邋ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｇｎｍｐ；邋Ｃ邋ｔｈｅ邋ＢＭＳＣｓ逡逑ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ邋ｇｒｏｕｐ）逡逑４．３各组卵母细胞获取数及体外受精结果逡逑如表２所示，化疗药物注射后１４天小鼠所获卵母细胞数显著减少，且受精率逡逑明显下降，胚胎卵裂率及囊巧形成率显著低于空白对照组。由表３和图２可见，逡逑ＢＭＳＣｓ移植后２个月

小鼠,建模,卵巢,卵母细胞

４．３各组卵母细胞获取数及体外受精结果逡逑如表２所示，化疗药物注射后１４天小鼠所获卵母细胞数显著减少，且受精率逡逑明显下降，胚胎卵裂率及囊巧形成率显著低于空白对照组。由表３和图２可见，逡逑ＢＭＳＣｓ移植后２个月，小鼠所获卵母细胞数明显增加，卵母细胞受精率升高，形态逡逑稍不规则，细胞碎片量明显低于建模对照姐，胚胎卵裂率及囊胚形成率均高于建逡逑模对照组，但各项指标仍显著低于空白对照组；而建模对照组小鼠所获胚胎数量逡逑较少，且形态异常，内含较多细胞碎片，潮临死亡，囊胚形成率极低；空白对照逡逑组小鼠所获胚胎数量明显高于建模对照组和建模移植组，且形态规则，细胞碎片逡逑少，发育较好，大部分均能发育至囊胚阶段。逡逑表２建模后１４天兰组小鼠获卵数及儕胎发育情况的比较逡逑Ｔａｂ．２邋Ｔｈｅ邋ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ邋ｏｆ邋ｒｅｔｒｉｅｖｅｄ邋ｏｏｃｙｔｅｓ邋ａｎｄ邋ｅｍｂｒｙｏ邋ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ邋ｐｏｔｅｎｔｉａｌ邋ａｍｏｎｇ邋ｔｈｒｅｅ逡逑ｇｒｏｕｐｓ邋ｏｎ邋１４化邋ｄａｙ邋ｏｆ邋ＰＯＦ邋ｍｏｄｅｌ邋巧ｔａｂｌｉｓｈｍｅ打ｔ逡逑１９逡逑

【参考文献】